转基因大（小）鼠定制技术服务

转基因大（小）鼠定制最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到大鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。 所使用的PiggyBac系统DNA显微注射，制备的转基因鼠基因表达阳性率为常规质粒DNA显微注射的2倍以上！

PiggyBac系统技术原理：

PiggyBac (PB) 系统是利用PB转座子特有的“剪切和粘贴”机制，使DNA片段在载体和基因组之间“自由”的转移，从而有效介导外源DNA片段对基因组的整合。转座时，转座酶有效的识别特异的转座子序列(ITRs)，与转座子末端结合形成短暂的发夹结构，“剪切”后脱离，“粘贴”至基因组的TTAA位点。Cyagen实验数据表明，PiggyBac系统基因表达阳性率为常规质粒DNA显微注射的2倍以上！

PiggyBac （PB）系统优势：

• 更高的整合效率

• 更高的目的基因表达概率

• 更大的目的片段的插入

• 更“精确”拷贝数的插入

• 可自由移除插入片段

转基因鼠类型

• 过表达转基因鼠

• RNAi转基因鼠

• microRNA转基因鼠

• 可诱导性/组织特异性转基因鼠

• BAC转基因大鼠

建系原则与流程

1、原核显微注射导入的目的基因是将目的基因随机整合到大鼠的基因组，因此首代转基因大鼠（F0）将会有不同的整合位点。整合基因的拷贝数可能在不 同的首代转基因大（小）鼠定制中也不同。因此，每只F0代鼠需要作为一个独立的谱系研究，并且与其它F0代鼠分开进行繁殖。由于外源基因一般只整合在二倍体动物的其中 一条染色体上，属于半合子，其后代只有一部分个体带有整合的基因，需要进行筛选鉴定。

2、原核显微注射获得PCR阳性F0代杂合子鼠。

3、F0代鼠达到性成熟后（8周）与野生型鼠进行交配，获得F1代鼠。

4、对交配获得的F1代鼠进行基因型鉴定，理论上，F1代鼠中有50%为转基因杂合子大鼠，50%为野生型鼠。

注意事项

1）每只F0代鼠基因型都不一样，不能进行F0之间的自交，只能先与野生型交配，筛选出基因型一致的F1。（假如F0代有多个位点的外源基于整合，F1还有可能有多种基因型）。

2） 获得F1鼠后，可以进行蛋白表达鉴定，优先筛选出表达的鼠后再进行后续的传代和保种。