原代细胞制备与培养操作方法

原代细胞制备与培养

将动物各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA) 或机械方法处理,分散成单细胞,在合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,麟美生物提原代培养服务供给您高质量的原代细胞株。原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。原代培养的方法很多,基本和最常用的是组织块培养法和分离细胞法。

基本操作过程 

1)、用培养液湿润所取组织材料,并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。再用平衡液(PBS)或Hanks液漂洗;用锋利的眼科弯剪将组织块剪成小块;再用PBS或Hanks液漂洗多次,直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。

2)、用湿润的吸管吸取切碎的组织块,清清吹到培养瓶皿中,并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上,量不要过多,要将组织块切面贴在培养瓶底壁上;

3)、将培养瓶翻转,使瓶底朝上,在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液,勿使组织块与培养液接触,塞紧瓶塞;

4)、将种植了组织块的一侧朝上,静置于37℃培养箱中;待组织块贴壁1h到3h后翻瓶,使贴壁的组织块浸没与培养液中,静置;

5)、每隔2到3天更换一次培养液,或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。

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