带你了解生物缓冲液HEPES的那些特征及应用

HEPES（4-羟乙基哌嗪乙磺酸） 分子式：C8H18N2O4SHEPES 它是一种两性离子有机化学缓冲剂，对细胞无毒性作用，同时它也是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的PH值范围，在PH值为7.2-7.4范围内具有较好的缓冲能力。

好的HEPES缓冲液具有以下特征：

1、pKa值介于6.0和8.0之间

2、高溶解度

3、膜不透性

4、对生化反应影响有限

5、极低的可见光和紫外线吸收

6、耐化学作用和酶解作用

7、易于制备

HEPES广泛用于多种生物化学反应，并在某些细胞培养基中用作缓冲试剂，它最大的优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值。细胞培养基中的HEPES浓度范围为10mM至25mM,注意HEPES不为细胞供给营养，只有在细胞培养过程中需要长时间在CO2培养箱外处理细胞时，才将其加入培养基，增强缓冲能力。

HEPES的使用方法有两种：

1、按照所需浓度直接加入到配置的培养溶液中，过滤除菌，每1000毫升培养液中加入2.38克HEPES，溶解后用1N NaOH调PH至7.2，过滤除菌后可使用。此时HEPES的使用浓度为10mmol/L。

2、配成100x贮存液(1mol/L)，取23.8gHEPES溶于90ml的双蒸水中，用1NNaOH调PH至7.5-8.0，然后用水定容至100ml,过滤除菌分小瓶装，4摄氏度至20摄氏度保存。使用前取99ml培养液加入1ml贮存液最终应用浓度仍为10mmol/L。