药剂学实验：软膏剂的制备及软膏剂的体外释药试验
一、目的和要求
1.掌握不同类型基质软膏的制备方法
2.根据药物和基质的性质，了解药物加入基质中的方法
3.了解软膏剂的质量评定方法
4.用琼脂扩散法测定不同类型软膏基质对药物释放的影响
二、基本概念和实验原理
软膏剂是药物与适宜基质均匀混合制成的外用半固体剂型。基质占软膏的绝大部分，它除起赋形剂的作用外，还对软膏剂的质量起重要作用。
常用的软膏基质可分为三类：①油脂性基质：此类基质包括烃类、类脂及动植物油脂。此类基质除凡士林等个别品种可单独作软膏基质外，大多是混合应用，以得到适宜的软膏基质。②乳剂型基质：系由半固体或固体油溶性成份，水（水溶性成份）和乳化剂制备而成。③水溶性及亲水性基质：水溶性基质是由天然或合成的高分子水溶性物质所组成。常用的有甘油明胶、纤维素衍生物及聚乙二醇等。
本实验是采用水杨酸为药物，制成不同类型的软膏。
软膏剂发挥治疗作用的首要条件是混合在软膏基质中的药物需要适当速度和有足够的量释放到达皮肤表面。因此，药物自软膏基质的释放速度是影响软膏剂作用的因素之一，可以通过研究药物从基质中的释放速度来评价软膏基质的优劣。药物从基质中的释放有多种体外试验测定方法，其中琼脂扩散法为应用较多的一种。琼脂扩散法是采用琼脂凝胶（或明胶）为扩散介质将软膏剂涂在含有指示剂的凝胶表面，放置一段时间后，测定药物与指示剂产生的色层高度来比较药物自基质中释放的速度。扩散距离与时间的关系可用Lockie等的经验式表示：
y2=KX
式中：y为扩散距离（mm）、X为扩散时间（h）、K为扩散系数（mm2·h-1）。
以不同时间呈色区的高度的平方（y2）对扩散时间（X）作图，应得一条通过原点的直线，此直线的斜率即为K，K值反映了软膏剂释药能力的大小。
三、仪器和材料
1.仪器：研钵，水浴锅，试管（4支），蒸发皿
2.材料：水杨酸，凡士林，羊毛脂，硬脂酸，吐温-80，司盘-80，液体石蜡，琼脂，三乙醇胺，单硬脂酸甘油酯，甘油，OP乳化剂，羧甲基纤维素钠，三氧化铁试液，尿素，硬石蜡，山梨酸，蒸馏水
3.实验动物：家兔
四、实验内容
1.油脂性基质
（1）处方：
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水杨酸 |
0.75 g |
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凡士林 |
15 g |
（2）制法：用水浴将凡士林熔化，待温度降至60℃左右，加入研细的水杨酸，边加边搅拌（或研磨）至凝固。
2.O/W型乳剂基质
（1）处方：
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水杨酸 |
2.0 g |
羊毛脂 |
0.4 g |
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硬脂酸 |
4.8 g |
三乙醇胺 |
0.16 g |
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单硬脂酸甘油酯 |
1.4 g |
吐温-80 |
0.04 g |
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凡士林 |
2.4 g |
蒸馏水 |
加至40 mL |
（2）制法：硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、凡士林、羊毛脂为油相，置于蒸发皿中，水浴上加热至80℃，另将三乙醇胺、吐温-80、蒸馏水置烧杯中，水浴加热至80℃。将水相缓缓倒入油相，水浴条件下不断搅拌至乳白色半固体状，室温下搅拌至冷凝，分次加入水杨酸，混匀。
3.W/O型乳剂基质
（1）处方：
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水杨酸 |
1.0 g |
液体石蜡 |
9.0 g |
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甘油 |
3.0 g |
OP乳化剂 |
0.1 g |
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蒸馏水 |
4.0 mL |
司盘-80 |
0.1 g |
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单硬脂酸甘油酯 |
2.5 g |
尼泊金乙酯 |
0.001 g |
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石蜡 |
1.0g |
（2）制法：将甘油、蒸馏水置于适当的容器内，加热至70～80℃；将单硬脂酸甘油酯、石蜡、液体石蜡、OP乳化剂和司盘-80等混合加热至70～80℃使熔化。将水相缓缓加到油相中，不断搅拌至冷凝；将水杨酸研细，分次加入上述基质研匀即得。
4.水溶性基质
（1）处方：
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水杨酸 |
1.3 g |
甘油 |
3.0 g |
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羧甲基纤维素钠 |
1.2 g |
蒸馏水 |
加至20 g |
（2）制法：将羧甲基纤维素、甘油置于乳钵中研匀，加适量蒸馏水使溶解，加蒸馏水至全量，分次少量加入水杨酸。
5.水杨酸软膏剂的体外释药试验
（1）格林氏溶液的配制：
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氯化钠 |
0.85 g |
氯化钙 |
0.048 g |
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氯化钾 |
0.03 g |
蒸馏水 |
加至100 mL |
（2）含指示剂的琼脂凝胶的制备：称取琼脂2 g加入到100 mL煮沸的林格氏溶液中，搅拌溶解，趁热用纱布过滤除去悬浮杂质。降温至60℃，加入三氯化铁试液3 mL（按照中国药典配制），混匀，立即沿壁倒入内径一样的4支小试管（试管长约10 cm），不得产生气泡，每管上端留1 cm长的空隙供填装软膏，直立静置，室温冷却成凝胶。
（3）软膏释药试验：在装有琼脂的试管上端空隙处，用软膏刀分别将不同类型的水杨酸软膏（油脂性基质、O/W型乳剂基质、W/O型乳剂基质、水溶性基质）填装入内，填装时应铺至与琼脂表面密切接触，并且应装至与试管口齐平。装填完后应直立放置并于0.5、1、2、3、4 h观察和测定呈色区的高度，记录于表5-1。
根据实验所得数据，用呈色区高度（即扩散距离y）的平方为纵座标，时间为横座标作图，拟合一直线，求此直线的斜率即为扩散系数K，填入上表，K值大释药速度越快。测得不同软膏的扩散系数K，比较各软膏基质的释药能力。
6.尿素乳膏（全校开放性实验1）
（1）处方（110 g量）：
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尿素 |
11 g |
OP乳化剂 |
1 mL |
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硬石蜡 |
10 g |
甘油 |
5 mL |
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山梨酸 |
0.1 g |
司盘-60 |
0.5 g |
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吐温-80 |
0.5 mL |
凡士林 |
20 g |
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硬脂酸 |
10 g |
蒸馏水 |
适量 |
（2）制法：取硬脂酸、硬石蜡、凡士林、司盘-60水浴加热使其熔化，80℃保温；另将甘油、吐温-80、OP乳化剂、蒸馏水、山梨酸混合并水浴加热至80℃，缓缓加入上述油液内并不断搅拌直至冷凝成膏状。取尿素用水适量溶解，加等量基质研匀，分次加剩余基质至全量研匀，即得。
（3）作用与用途：用于手、足皲裂，包括角化型手足癣所引起的皲裂，亦可用于寻常性鱼鳞癣、先天性鱼鳞癣，老年性干皮病，进行性指掌角皮炎等。
（4）用法与用量：外用，涂患处适量，一日1-2次。
（5）质量要求：本品应为白色、质地细腻，具适当粘稠性，易涂布于皮肤或粘膜上而不融化，但能软化，无不良刺激，无粗糙感。
（6）定性鉴别：采用化学反应法鉴别尿素。
（7）检查：
最低装量检查：取供试样品5个，除去外盖和标签，容器外壁用适宜的方法清洁并干燥。分别精密称定重量，除去内容物。容器用适宜的溶剂洗净并干燥，再精密称定空容器的重量，求出每个容器内容物的装量与平均装量，应不少于标示装量，且每个容器装量，应不少于标示装量的93%。如有1个容器装量不符合规定，则另取5个复试，应全部符合规定。
酸碱度：取供试品加乙醇振摇，所得溶液遇酚酞或甲基橙均不得变色。基质pH不大于8.5。
稳定性：取供试样品装入带塞试管中，分别于55℃恒温放置6 h、-15℃恒温放置24 h，观察有无液化、粗化、分层等现象。将供试品置于l0 mL离心管中，离心30 min（3000 r·min-1），应无分层现象。
刺激性：剃去兔背上的毛约2.5 cm2，休息24 h，待剃毛产生的刺激痊愈后，取供试样品0.5 g均匀地涂布于剃毛部位。24 h后观察有无水疱、发疹、发红现象。每次试验在3个不同部位同时进行，每一试验进行数次，同时用空白基质作对照。另外，将供试品敷于手臂及大腿内侧等柔软的皮肤表面，24 h后观察该部位皮肤的反应。若引起疼痛、红肿等不良反应，不宜使用。
微生物限度检查：根据《中国药典》2015年版（四部）通则1105项下检查，不得检出绿脓杆菌和金黄色葡萄球菌，用于溃疡面及破裂创面的软膏不得检出破伤风杆菌。每克含细菌数不得超过100个，含霉菌和酵母菌数不得超过100个。
7.林可霉素利多卡因凝胶（全校开放性实验2）
（1）处方（10 g）：
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盐酸林可霉素 |
5 mg |
盐酸利多卡因 |
4 mg |
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卡波姆940 |
12 mg |
乳酸依沙吖啶 |
0.2 mg |
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甘油 |
50 mg |
维生素K3亚硫酸氢钠 |
0.5 mg |
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32218水溶性香精 |
0.8 mg |
着色剂亮蓝 |
0.02 mg |
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碳酸氢钠 |
12 mg |
去离子水 |
适量 |
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乙醇 |
适量 |
（2）制法：将卡波姆与部分水混合，至溶胀完全后，再与盐酸林可霉素、甘油、盐酸利多卡因、乳酸依沙吖啶、维生素K3亚硫酸氢钠、香精、着色剂、剩余水和乙醇混合。利用碳酸氢钠调节pH值到7.0~9.0，混合即得。
（3）作用与用途：用于轻度烧伤、创伤及蚊虫叮咬引起的各种皮肤感染。
（4）用法与用量：外用，涂搽患处，一日2～3次。
（5）国家药品标准
林可霉素利多卡因凝胶Linkemeisu Liduokayin NingjiaoLincomycin Hydrochloride and Lidocaine Hydrochloride Gel
本品含盐酸林可霉素，按林可霉素(C18H34N2O6S)计算，应为标示量的90.0%～120.0%。含盐酸利多卡因应为标示量的90.0%～110.0%。
【性状】本品为绿色透明的水性凝胶。
【鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液应出现与林可霉素对照品相同保留时间的色谱峰。
（2）取本品2.5 g，加水10 mL，搅匀，加氯仿10 mL搅拌数分钟，放置分层，取氯仿层水浴蒸干，加甲醇2 ml溶解，作为供试品溶液；另取利多卡因对照品，加甲醇制成每1 mL中含5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版（四部）通则0502项）试验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-氨水（19:1:0.5）为展开剂，展开后，晾干，喷以碘化铋钾试液，使显色，供试品溶液所显斑点的颜色和位置应与对照品的斑点相同。
（3）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应（《中国药典》2015年版（四部）通则0801项）
【检查】应符合凝胶剂项下有关的各项规定（《中国药典》2015年版（四部）通则0114项）。
【含量测定】照高效液相色谱法（《中国药典》2015年版（四部）通则0512项）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05 mol·L-1硼砂溶液（用85%磷酸溶液调节pH值至6.0）-甲醇-乙腈（75:15:10）为流动相；柱温30℃；检测波长为214 nm。理论板数按林可霉素峰计算应不低于1500。
测定法 精密称取本品适量（约相当于林可霉素20 mg），置烧杯中，加入上述0.05 mol·L-1硼砂溶液适量，用玻棒充分搅拌使分散均匀并溶解后，转移至100 ml量瓶中，加0.05 mol·L-1硼砂溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，另取林可霉素对照品适量，用0.05 mol·L-1硼砂溶液制成每1 mL中含林可霉素0.2 mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
【类别】抗生素类药
【规格】（1）10 g：0.05 g (C18H34N2O6S)与0.04 g (C14H22N2O˙HCl)
（2）20 g：0.1 g (C18H34N2O6S)与0.08 g (C14H22N2O˙HCl)
【贮藏】密封保存
【有效期】暂定2年
【曾用名】绿药膏
8.清凉油的制备（全校开放性实验3）
（1）处方：薄荷油20~28%；凡士林5~10%；冰片0.5~1%；维生素C 0.2~0.5%；香精0.05~0.1%；甘油30~35%；液体石蜡补充至100%。
（2）制备方法：a、将冰片、维生素C、香精、重量百分比为20~28%的薄荷油和薰衣草油加入到容器中进行搅拌，得到混合物，将混合物进行密封；b、将液体石蜡、凡士林和甘油加入到罐体中进行加热并搅拌，融化成液态后的基质，备用；c、将步骤a中得到的混合物和步骤b中得到的基质一同加入到混合罐中搅拌，使各材料均匀混合成为霜状。
9.痤疮乳膏的制备（全校开放实验4）
（1）处方：
维A酸1.5 g，马来酸氯苯那敏4 g，硫酸阿米卡星20 g，月桂氮酮5 g，羊毛脂170 g，软膏基质加至1000 g
（2）制备方法：
将维A酸置乳钵中研细过9号筛细粉备用。将马来酸氯苯那敏加到100 mL硫酸阿米卡星水溶液中搅拌溶解后，再将热溶的羊毛脂搅拌下加到上述溶液中，用大号乳钵研磨均匀，待水溶液完全被羊毛脂吸收后，再将维A酸细粉均匀加入搅拌，补加溶化的凡士林至总量，充分研磨均匀，冷却后分装即得。
五、操作要点和注意事项
1.采用乳化法制备W/O型或O/W型乳剂基质时，油相和水相应分别于水浴上加热并保持温度在80℃，然后将水相缓缓加入油相溶液中，边加边顺向搅拌。若不是沿一个方向搅拌，往往难以制得合格的乳剂基质。
2.尽管体外释药试验是模拟人体条件进行的，但体外试验条件与实际应用情况（如琼脂与完整皮肤相比）有很大不同，因此体外测定数据有一定的局限性，多数是比较性的，可以作为选择软膏剂基质的实验手段之一。
六、思考题
1.O/W型乳剂基质中加凡士林除作为油相成份外，有何医疗作用？
2.O/W型乳剂基质常用哪几种乳化剂？
3.根据琼脂试验法结果说明4种基质类型具有不同释药能力的原因。
4.琼脂试验法与经皮扩散试验各有何特点？