微生物检测常见问题问答集锦（二）
食品微生物检测
应广大粉丝的需求，小编将陆续推出《微生物检验问答集锦》系列。本系列所列出的问题均是微生物检验过程中提问频次较高的问题，我们咨询专家老师后汇编，希望可以帮助微生物检验从业人员对检验过程中遇到的问题有新的理解。大家对感兴趣的、比较关注的问题，也可以后台留言，我们一起交流探讨！
答：GB 4789.1里规定要定期进行，没有明确说什么时候进行。自己实验室需要制定sop进行规定，比如我们实验室总是检出某个致病菌的阳性结果，就规定一个月的时间来进行阳性对照。保证实验室人员具有可以持续进行阳性检出的能力的。最新的RB/T 038-2020 食品微生物检测结果质量监控指南文件里规定：对于日常质量监控,应执行检测方法的规定，否则建议每批或每组样品每20个样品1次的频次进行；质控不一定需要人工污染样品来做，可以用标准菌株来做阳性和阴性对照。
答：目前的标准需要做，配套添加剂不需要单独验收。
GB4789.28是一个最低的标准，一定要达到。比如EC肉汤只写了大肠埃希氏菌和粪肠球菌这两的菌株，必须要达到，如果企业自己的验收标准（里包含了国家标准里的菌株）高于国家标准，那就更好。
答：主要是琼脂分布不均导致的。建议琼脂类培养基灭菌前加热溶解均匀（如果是大体积配制进行分装灭菌的培养基，建议煮沸溶解，搅拌分装）；灭菌后，使用前，关注培养基的透光性是否均一，如果不均一，轻轻摇晃使其均匀，再倾注平皿使用。
平皿干裂缩水，与琼脂的保水性、倾注培养基的量、平皿的透气性、培养箱条件等因素均有关系。
a.琼脂：不同的琼脂在保水性方面略有差异，保水性差的琼脂可能会出现严重缩水或者干裂。
b.培养基的量：倾注的培养基越少，平板越薄越容易干裂。按照GB4789要求，倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少为3 mm（直径90 mm的平皿，通常要加入18 mL～20 mL琼脂培养基）。如果平板需储存，或者培养时间超过48 h或培养温度高于40 ℃，则需要倾注更多的培养基。
c.平皿的透气性：平板的密封性越好，保存和培养过程中培养基失水越少。虽然增加平板的密封性可以减少水份流失，但并非密封性越高越好，一些需氧型微生物（如铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌等），在密闭环境中生长较差，需要良好的透气性才能较好的生长。
d. 培养条件：培养箱是影响平皿干裂问题的关键因素之一。大型的培养箱为了保证内部温度均一，通常带有较强的鼓风系统，内部有较强的空气流动。而气流越强，则越容易导致平皿失水。而对于一些没有鼓风系统的小型培养箱，则很少会出现平皿干裂现象。在培养箱内摆放平皿时，应尽量避开风口气流大的位置，同时远离培养箱内部发热板。
综上所述，在遇到平板干裂缩水问题时，可通过增加平板培养基厚度、培养箱内增加挡板降低气流或避开风口、选择合适透气性的平皿、选择适宜琼脂的的培养基等进行综合的考虑分析，制定对应的方案和措施。
答：《GB4789.28 -2013培养基的试剂和质量要求》标准中指出，含有活性化学物质或不稳定性成分的固体培养基也应即配即用，不可二次融化；因此对于一些已添加抗生素、卵黄、血清等不稳定成分的培养基，不可以再次融化使用。而对于一般的培养基（未开封启用），可使用沸水浴或采用有相同效果的方法使培养基融化，再次融化后未用完的培养基则不能重新凝固留待下次使用。
答：标准菌株存活性就是其的复活过程，我们购买的标准菌株一般是冻干粉或者冻干管，然后我们要对其进行复活培养，这个过程是必须的，否则我们没有办法使用。针对其存活性的验证，所有的标准法规中都是其存活性的判断，一个定性的判断。复活的过程对其进行打管，按照标准要求进行培养，如果接种到液体培养，有肉眼可见的浑浊或者进一步镜检时有目标微生物生长；如果接种到固体培养上，有肉眼可见的菌落，这些都叫存活性合格。
实验室多久做一次沉降菌检测，哪个标准有规定？
答：每两周要做一次沉降菌检测包括操作台和房间的，方法可以参照GB/T 16294-2010，GB/T 27405-2008《实验室质量控制规范食品微生物检测 食品微生物检测》附录中有规定。
实验室紫外灯怎么清洁？使用多久需要换新的紫外灯？还是说只要能用就不需要更换？
答：紫外线杀菌灯可以用纱布沾上75%酒精擦拭表面。紫外灯都有使用寿命，对于洁净室、生物安全柜等最好能够记录紫外灯的使用时间，到时间后必须更换。再就是根据定期的沉降菌监测情况更换紫外灯。
灭菌后的琼脂培养基，是否可以在恒温箱或者恒温水浴锅过夜或更长时间存放？对培养基性能会有影响吗？
答：《GB4789.28 -2013培养基的试剂和质量要求》标准中指出，融化后的培养基放入47～50℃的恒温水浴锅中冷却保温(可根据实际培养基凝固温度适当提高水浴锅温度)，直至使用，培养基达到47℃～50℃的时间与培养基的品种、体积、数量有关。融化后的培养基应尽快使用，放置时间一般不应超过4 h。
长时间的保温可能会造成培养基的营养成分流失，灵敏度下降，培养效果变差，琼脂的凝胶强度降低等情况，保温过夜或更长时间这种操作方法不是很规范。一般建议在满足试验安排的情况下，恒温存放的时间越短越好。