什么,SRA测序数据要收费了

可以发现,这些三年前的视频教程里面都是从SRA(Sequence Read Archive)数据库下载文献的测序数据,我也在五年前详细解读过SRA数据库的结构:

层级结构是:SRP(项目)—>SRS(样本)—>SRX(数据产生)—>SRR(数据本身) 伴随数据库是project,层级是PRJNA —> SAMN 链接如下:

  • https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra?term=SRP078156 查看样本列表
  • https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Traces/study/?acc=SRP078156 下载样本ID表格
  • https://www.ncbi.nlm.nih.gov/bioproject/PRJNA327548
  • https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra?term=SAMN05341212

当然了,实际上是有六种不同的SRA数据库编号,以S开头,官方说明链接:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK56913/#search.what_do_the_different_sra_accessi 不过我们不需要掌握那么多。

但是很多学员反馈说,跟着我的代码,下载SRA数据库的文件速度非常感人,也就是十几KB每秒,而我们的测序原始数据经常就几个TB,所以都放弃了。

后来我又统一了文献数据下载教程,因为美国的NCBI的SRA与欧洲的EBI-EMBL以及日本的DDBJ数据库共享数据,所以我建议大家去EBI下载,见:使用ebi数据库直接下载fastq测序数据  , 首先使用conda安装aspera

conda create -n download
conda activate download
conda install -y -c hcc aspera-cli
conda install -y -c bioconda sra-tools
which ascp
## 一定要搞清楚你的软件被conda安装在哪
ls -lh ~/miniconda3/etc/asperaweb_id_dsa.openssh

我们已经多次介绍过conda细节了,这里就不再赘述。

然后就可以使用conda配置好的aspera软件进行高速下载,同时需要学习欧洲的EBI-EMBL以及日本的DDBJ数据库的编号规则:

欧洲的EBI-EMBL以及日本的DDBJ数据库的编号规则

首先SRA数据库准备放弃存储碱基质量值

但是今天(2020-07-04 )刷朋友圈居然看到了 Heng Li 的推特截图:

SRA数据库准备放弃存储碱基质量值

居然,SRA数据库准备抛弃用户上传的fastq测序数据里面的质量值。

关于fastq格式测序数据

FastQ格式也是序列格式中常见的一种,它存储了生物序列以及相应的质量评价,其序列以及质量信息都是使用一个ASCII字符标示,最初由Sanger开发,目的是将FASTA序列与质量数据放到一起,目前已经成为高通量测序结果的通行标准格式。

FastQ格式和FastA格式都是用来表示序列,其中FastQ格式是4行表示一个序列,而FastA格式只有两行。FastQ格式增加了2行,但其实仅仅是增加了序列对应碱基的质量值信息。

FASTQ文件中每个序列通常有四行:

  • 1.第一行:必须以“@”开头,后面跟着唯一的序列ID标识符,然后跟着可选的序列描述内容,标识符与描述内容用空格分开;这个与FastA格式的第一行类似,差异就是FastA格式的序列标识通常是大于号">"开头。
  • 2.第二行:序列本身,只允许使用既定的核苷酸或氨基酸编码符号,编码规则见前文的标准IUB / IUPAC 表格;
  • 3.第三行:通常就是一个简单加号字符“+”占位即可
  • 4.第四行:序列的碱基组成的质量字符,每个字符对应第二行相应位置碱基或氨基酸的质量。

重点是理解质量字符,比如A,首先大家需要理解ASCII码,然后需要理解Phred quality score

居然还收费

怕粉丝理解不清楚,Heng Li又解释了一番:

SRA数据库提供付费下载

不知道是不是疫情影响?他们经费缩减?

我感觉可以考虑国内的测序数据存储中心了,大家可以留言推荐一下国内好用的数据库哦!直接留言上墙!

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