哺乳动物基因表达Tol2载体是什么？

　　Tol2载体系统能高效地将外源DNA插入宿主细胞基因组中。该系统技术简单，利用质粒转染（非病毒转导）将目的基因永久整合到宿主基因组中。

　　该系统来源于Tol2转座子，它最初是从硬骨鱼青鳉鱼（Oryzias latipes）中分离出来的。 基于序列同源性分析，发现Tol2转座子与整个脊椎动物基因组中发现的非自主元件的hAT家族密切相关。

　　Tol2系统包含两个载体，一个载体被称为辅助质粒，负责编码转座酶；另一个载体被称为转座子质粒，包含两个反向末端重复序列（ITRs）以及两者之间的转座区域，需要被转座到宿主基因组中的目的基因就克隆在这个区域。

　　当辅助质粒和转座子质粒共转染靶细胞时，辅助质粒产生的转座酶将会识别转座子的两个ITR，然后将被转座区和两个ITR元件插入到宿主基因组中。Tol2转座子在宿主细胞中的插入位点没有明显碱基偏好性，这不同于具有特定靶标位点的转座子系统。如，piggyBac转座插入通常发生在包含TTAA序列的宿主染色体位点。

　　Tol2是II类转座子，通过“剪切—粘贴”的机制移动，从一个地方转座到另一个地方，而不留下序列本身（恰好相反，I类转座子是通过“复制—粘贴”的方式移动）。Tol2通过“剪切-粘贴”机制以单拷贝进行整合，在每一个插入位点都会产生一个8 bp的重复序列。

　　有两种途径可将转座酶导入靶细胞。第一种是将辅助质粒瞬时转染到细胞中，使转座酶的瞬时表达。 第二种是利用辅助质粒体外转录出Tol2 mRNA，然后注射到靶细胞中。无论哪种情况，转座酶都只能短时间表达。 随着辅助质粒的丢失或转座酶mRNA的降解，转座子会永久整合到宿主基因组中。如果将Tol2转座酶重新导入细胞中，整合的转座子会再次通过“剪切—粘贴”的机制移动。