gRNA慢病毒载体构建技术原理

gRNA慢病毒载体由慢病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUCori。慢病毒基因组序列是从元件5'LTR开始，到元件3'LTR结束。

慢病毒基因组序列可容纳两个外源基因表达盒子：一个是gRNA表达盒子，另外一个是marker基因表达盒子。Marker基因表达盒子已经克隆在载体上，无需重新构建。我们提供了荧光marker、抗药性marker或者荧光／抗药性双marker供您选择。gRNA表达盒子则包括三部分序列：U6启动子、gRNA和终止子。U6启动子已经克隆在载体上，每次构建载体，只需通过annealing-ligation技术将感兴趣的gRNA打靶序列克隆到载体上即可。gRNA打靶序列与gRNA scaffold序列构成一个完整的gRNA。