在体敲除AAV-saCas9

最早在细菌中被发现，CRISPR-Cas9系统能够切割DNA，充当了对抗病毒感染的一个重要防御机制。尽管许多的微生物物种都拥有这一系统，研究人员优先选择改造了来自化脓链球菌的Cas9酶(SpCas9)来改变高等生物的DNA，并已成为一系列高度通用的基因组修饰技术的基础。

要想扰乱成体动物中的基因，必须要利用一些载体将CRISPR-Cas9系统的关键元件导入到细胞中。由于不会引起人类疾病并已在欧洲获得临床监管机构的批准，腺相关病毒(AAV)被视为是最有前景的候选载体之一。然而，AAV微小的负载能力使得同时包装SpCas9酶和其他基因编辑必需的元件进入到单个病毒颗粒中成为一个挑战。

麻省理工的科学家张峰研究员最新的研究发现一种来自金黄色葡萄球菌的Cas9核酸酶(SaCas9)，它比SpCas9小25%，在AAV病毒的包装容量范围之内，从而为AAV的包装问题提供了一个解决方案。

Nature. 2015 Apr 9;520(7546):186-91

AAV载体不同血清型

研究发现 AAV 具有多种血清型，各种不同血清型的 AAV 载体的主要区别是衣壳蛋白不同，因此对不同的组织和细胞的转染效率存在差异。见表 1。

表1.12种不同血清型AAV对各组织器官细胞的亲和性

AAV-SaCas9流程