载体原核抗性

抗菌素抗性标记及筛选原理

大多数质粒载体都是用抗菌素抗性标记，包括氨苄青霉素抗性(Ampr)、卡那霉素抗性(Kanr)、四环素抗性(Tetr) 、链霉素抗性(Strr)和氯霉素抗性(Cmlr)等。

i)氨苄青霉素(Amicllin,Amp)是青霉素的衍生物，通过干扰细菌细胞壁合成的末端反应，杀死生长的细菌。细菌质粒Amp r基因编码b~内酰胺酶，特异地切割氨苄青霉素的b-内酰胺环。

ii)氯霉素(chloramphenicol， Cml) 通过与50S核糖体亚基结合，干扰细胞蛋白质的合成并阻止肽键的形成。杀死生长的细菌。细菌抗性原理是Cml r编码乙酰转移酶，特异地使氯:霉素乙酰化而失活。

iii)卡那霉素(kanamycin，Kan) 通过与70S 核糖体结合，导致mRNA发生错读。杀死细菌。而Kan r编码的氨基糖苷磷酸转移酶，对卡那霉素进行修饰，阻断其与核糖体结合作用。

iv)链霉素(Streptomycin， Str) 通过与30S核糖体亚基结合，导致mRNA错译。杀死细菌。Sur r编码一种氨基糖苷磷酸转移酶对链霉素进行修饰，阻断其与核糖体30S亚基结合作用。

v)四环素(Tetracycline， Tet) 通过于30S核糖体亚基结合，干扰细胞蛋白质的合成并阻止肽键的形成。杀死生长的细菌。Tet r编码特异性蛋白质，对细菌的膜结构进行修饰, .组止四环素通过细胞膜进入细菌细胞内。

抗生素抗性筛选原理是:不带有抗菌素抗性基因的受体菌不能在含有抗菌素的培养基(选择培养基)中生长。当带有抗菌素抗性基因的载体进入受体菌后，受体菌才能生长。