流式细胞术的样本制备操作方法及步骤
1. 胰蛋白酶消化法：
适用于消化间质较少的组织，如上皮、肝、肾等组织。
实例分享：
将组织块用无钙、镁离子的PBS漂洗干净;
将组织置于培养皿中，用剪刀剪成小颗粒(1~2mm3);
加入30倍组织量的酶溶液(0.1%胰蛋白酶和0.02%EDTA等比混合);
移液管转至50ml离心管中，置于37℃水浴或者恒温箱摇床中，消化20-60min;若需消化较长时间，可每隔15min将2/3的消化上清液转移到离心管中冰浴或离心去除消化液，加入含血清培养基终止消化，另补充新的消化液至离心管中继续消化;
将消化液或分批收集的细胞悬液经100目的滤网过滤，300g离心5min，弃上清;
PBS等buffer离心洗涤1~2次;
染色，过滤准备上机检测。
2. 胶原蛋白酶消化法：
此法适用于分离纤维性组织、上皮及癌组织，即纤维多的硬组织。钙、镁离子不会抑制消化作用，因此可用PBS或含血清培养基配制以提高细胞成活率。
实例分享：
将组织块用PBS漂洗干净;
置于培养皿中，剪成小颗粒(1~2mm3);
加入30倍组织量的蛋白酶溶液(0.1~0.3μg/ml的胶原蛋白酶);
移液管转至50ml离心管，置于37℃水浴或者恒温摇床中消化3-48h，后续过程具体方法同胰酶消化法。
Tips：
1，新鲜组织标本应及时进行处理保存，以免组织在室温下放置时间过长(24h内)，产生中心组织坏死或者细胞自融，影响FACS测定结果;
2，不同的实体组织应选取不同的制备方法;
3，酶学法要注意条件的选择和影响因素，同时注意酶的溶剂、消化时间、pH值、浓度等方法对酶消化法的影响;如消化时间太短细胞消化不完全，消化太长会产生损伤;
4，如何判断消化成功?如发现组织块已分散而失去块状，经摇动可成为絮状悬液，可取出少量液体在显微镜下观察，可见分散的单个细胞和少量的细胞团，可认为消化充分。
5，在使用酶学方法时，应重视酶的选择，如含有大量结缔组织的肿瘤----食管癌、乳腺癌、皮肤癌等，应选用胶原酶消化。