冰冻切片中细胞内冰晶形态特点及常见原因的知识清单

术中冰冻切片中，冰晶的形态常见细胞外冰晶和细胞内冰晶。顾名思义，细胞外冰晶就是水分子在细胞外形成结晶体，而细胞内冰晶就是水分子在细胞内形成结晶体。细胞外冰晶和细胞内冰晶的形成从底层原理来说，都是组织降温速度不够快，未能使组织快速达到玻璃态转化点以下形成玻璃态凝固。但在我们冰冻制片操作过程中，细胞外冰晶与细胞内冰晶在形成原因上还是有所不同的。

直播课程过后，将有关冰冻切片细胞内冰晶的知识要点列个清单，方便小伙伴们复习查阅。

冰冻切片中细胞内冰晶形态特点与形成原理知识清单

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细胞内冰晶的形态特点：冰晶出现在细胞内，以出现的部位不同，可以分为胞质内冰晶和胞核内冰晶。细胞内冰晶形成，一般仅仅对细胞的局部结构造成挤压，细胞局部形态受到影响，但整个细胞不出现明显收缩，组织的形态结构不出现明显变形。

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胞质内冰晶比较常见于胞质丰富的细胞中，例如横纹肌细胞。

无冰晶形成（横纹肌）

胞质内冰晶形成（横纹肌）

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胞核内冰晶比较常见于细胞核大的细胞中，如鳞状上皮细胞、鳞状细胞癌、甲状腺癌、乳腺癌等。

无冰晶形成（甲状腺乳头状癌）

胞核内冰晶形成（甲状腺乳头状癌）

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细胞内冰晶一般出现在使用速冻手段（冷冻锤或冷冻剂）冷冻组织，但冷冻锤的温度不够低，或有阻碍降温的因素存在时，都会引起细胞内冰晶大量形成。

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导致冷冻锤温度不够低的因素：（1）速冻台温度不够低，温度不足-20℃；（2）冷冻锤未放置在速冻台上；（3）某些冰冻切片机的冷冻锤为悬吊状态，冷冻锤不能接触速冻台而导致冷冻锤的温度仅仅与箱温一致；（4）因比热容和传导速率不同，不同材质和质量的冷冻锤对热量的传导有差异，不同的冷冻锤冷冻组织产生的冰晶的形态与数量也会有所差异。

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冷冻锤体积相同，质量越重者越好；材质上铜优于铝，铝优于不锈钢。

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用足够冷的冷冻锤（低于-30摄℃）冷冻组织，粗修组织过多，冰冻切片中的细胞内冰晶也会增多。

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细胞内冰晶形成的原理：在使用冷冻锤等加速冷冻的时候，组织温度不能迅速低于玻璃态转化点的时候，晶核形成，但为多中心式。晶核形成起始位置一般为细胞内温度高的区域，细胞核内冰晶为常见的现象。因为细胞内外基本同时降温，基本不会引起细胞内外渗透压差，细胞内外液渗出的现象不明显，细胞收缩不明显，也不出现组织结构的明显变形。

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