稳转细胞株(系)构建方法

稳转株即稳定表达细胞株，指的是基于某一细胞系构建的持续过表达或干扰某特定基因的细胞系。慢病毒感染-药物筛选法是目前广泛应用的稳转株构建方法，具有高效整合、目标细胞广泛等特点。

稳定转染：

转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对

靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，

从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。

筛选稳定细胞系有两种方法：

1）转染质粒后，筛选获得稳转细胞系；

2）慢病毒感染筛选稳定细胞系。慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。

稳转株应用：

1）基因过表达服务

2）shRNA 干扰服务

3）miRNA过表达

4）任意非编码基因的过表达

稳转株构建中的常见问题

1.支原体污染问题

由于轻度的支原体污染并不影响细胞的生长和增殖，故被许多实验室所忽略。但支原体易在病毒感染细胞后爆发，出现大量细胞碎片，甚至导致细胞死亡，导致稳转株筛选的失败。我们建议在稳转株构建之初，务必排除细胞及培养环境中的支原体污染（赛业可提供稳定细胞株构建）。

2. 其他问题

除支原体污染之外，还有以下问题会经常出现于稳转株构建中。