治疗中风病气虚血瘀证的复方中药.pdf

19中华人民共和国国家知识产权局 12发明专利申请 10申请公布号 43申请公布日 21申请号 201710664681.5 22申请日 2017.08.04 71申请人 南宁市净雪皇生物工程有限公司 地址 530000 广西壮族自治区南宁市高新 区高新技术开发区高新大道东段25号 科技企业孵化基地科技综合楼3楼304 室 72发明人 许振朝 宋延坤 黄俊 覃壬 张雄胜 宋茹雪 74专利代理机构 广西南宁公平知识产权代理 有限公司 45104 代理人 杨立华 51Int.Cl. A61K 36/4812006.01 A61P 9/102006.01 A61P 7/022006.01 A61K 35/642015.01 A61K 35/622006.01 54发明名称 治疗中风病气虚血瘀证的复方中药 57摘要 本发明公开了一种治疗中风病气虚血瘀证 的复方中药， 主要由以下药材制成 金边蚂蟥、 土 元、 地龙、 黄芪。 该药采用具有极强活血化瘀功效 的广西特有的天然动物药金边蚂蟥达到活血化 瘀、 益气通络功效。 大量的实验研究证明， 本发明 具有明显的抗血栓作用及体内抗凝血作用， 对微 循环障碍有显著改善作用， 对高脂血症有一定的 降血脂作用， 疗效确切。 据此， 发明人结合现代科 学制剂工艺制成了纯中药复方制剂蛭血通 肠溶胶囊。 临床实践表明， 本发明治疗中风病气 虚血瘀证临床疗效好， 治愈率高， 应用方便， 安全 性高， 无明显毒副作用， 不良反应少而轻， 未见出 现出血、 血小板减少等严重毒副作用。 权利要求书1页 说明书35页 CN 107837296 A 2018.03.27 CN 107837296 A 1.一种治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于主要由以下药材制成 金边蚂 蟥、 土元、 地龙、 黄芪。 2.根据权利要求1所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于主要由以下 重量份的药材制成 金边蚂蟥4-50份， 土元3-20份， 地龙5-40份， 黄芪10-80份。 3.根据权利要求2所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于主要由以下 重量份的药材制成 金边蚂蟥4份， 土元3份， 地龙5份， 黄芪10份。 4.根据权利要求1所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于是由药材和 辅料制成的复方制剂。 5.根据权利要求4所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于 所述复方制 剂为胶囊剂、 片剂或滴剂。 6.根据权利要求5所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于 所述胶囊剂 为肠溶胶囊。 7.根据权利要求6所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于所述肠溶胶 囊按以下步骤制备 金边蚂蟥抗凝血活性组分的提取 取金边蚂蟥干体粉碎成粉， 过60目筛， 按质量体积比1 8-10加0.9氯化钠水溶液， 于 4-8浸泡6h， 其间每30min搅拌1次， 然后粗滤， 滤液高速离心， 取离心液用三氯乙酸溶液调 pH值至2.5， 8-10静置24h， 滤过， 滤液超滤， 收集浓缩滤液， 溶液调pH值至7.0， 过滤， 收集 滤液， 冷冻干燥得金边蚂蟥干膏； 土元、 地龙、 黄芪的提取 取土元、 地龙打成粗粉， 加入黄芪饮片， 共同浸泡0.5h， 加水煮两次， 第一次按质量体积 比1 8加水煮40min， 第二次按质量体积比1 6加水煮30min， 静置8h， 过滤， 合并滤液， 浓缩， 干燥得土元、 地龙、 黄芪干膏； 肠溶胶囊的制备 取金边蚂蟥干膏过80目筛， 对倍法加入土元、 地龙、 黄芪干膏粉， 拌匀， 加入适量辅料淀 粉， 制粒， 装肠溶胶囊， 即得蛭血通肠溶胶囊。 8.根据权利要求7所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于步骤所得 金边蚂蟥干膏的抗凝血活性为4000-6000u/g。 9.根据权利要求8所述的治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 其特征在于步骤所得 每粒肠溶胶囊内容物0.4g， 含金边蚂蟥抗凝血活性单位大于120ATU。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107837296 A 2 治疗中风病气虚血瘀证的复方中药 技术领域 0001 本发明属于中风治疗技术领域， 尤其涉及一种治疗中风病气虚血瘀证的复方 中 药。 背景技术 0002 中风是由脑血管障碍引起的危重疾病， 主因脏腑气血亏虚， 造成气血运行迟 缓而 瘀塞脑络。 治疗及预防心脑血管疾病， 如中凤、 中风后遗症、 冠心病等， 最 常应用的两个抗 凝血药物是阿司匹林及肝素， 然而它们都不同程度地存在不良反 应及毒副作用 0003 1阿司匹林 0004 在心脑血管疾病的预防及治疗中， 如中风、 中风后遗症、 脑梗、 心梗、 冠心 病等， 阿 司匹林的应用非常广泛。 但大家也非常明白阿司匹林有诸多不良反应及 严重且须极度注 意的毒副作用问题， 如1出血， 2胃肠道症状， 3典型的阿司匹林 三联症阿司匹林不耐受、 哮 喘与鼻息肉， 4神经症状， 5肝损伤， 6长期使用 可发生间质性肾炎、 肾乳头坏死、 肾功能减 退， 7长期应用阿司匹林可导致缺铁 性贫血， 8中毒剂量可通过直接和中枢性血管运动麻痹 作用而抑制循环功能， 9 阿司匹林应用于儿童流感或水痘治疗时可能引起瑞氏综合征， 10 特异性体质者服 用阿司匹林后可引起皮疹、 血管神经性水肿及哮喘等过敏反应等。 0005 2肝素 0006 肝素在心脑血管疾病治疗的应用非常广泛， 但肝素不良反应、 毒副作用也较 为严 重， 常见的主要不良反应有3种 一是易引起自发性出血， 二是诱导的血小 板减少症， 三是 长期应用肝素可致脱发、 骨质疏松和自发骨折， 也偶见过敏反应。 0007 为避免西药治疗中风等疾病的诸多隐患， 中医药疗法愈来愈成为当前重要治 疗 手段之一。 0008 国家 “十一五” 中药材发展规划中， 水蛭等10种药材列入优先发展规划。 全 国活血 化瘀学术会议上， 水蛭被定为活血化瘀作用最显著的前10种中药材之一。 金边蚂蟥 Poecilobdella manillensis， 壮药叫褚平怀是一百多种水蛭中的 一种， 主产广西， 载入 “广西壮药标准” ， 是一个新的抗凝血药物， 其最有效成 分是菲牛蛭素。 水蛭素有十多个种 类， 金边蚂蟥菲牛蛭素是目前最强的一种， 其多种药理活性最终使血液流畅通达， 是临 床功效的灵魂， 壮药称其能通龙路火 路。 国内外研究表明， 其优点是 1水蛭素是目前发现 最强的抗凝血物质， 专属 性与特异性很强； 2不但能抗凝血， 且能溶血栓、 改善血液流变性； 3可以口服； 4另一优点是安全， 不良反应少、 毒副作用小， 避开了此类药物的严重不良反应 及毒副作用。 发明内容 0009 本发明要解决的技术问题是提供一种安全可靠、 疗效确切的治疗中风病气虚 血 瘀证的复方中药， 该药无明显毒副作用， 未见引起出血等严重毒副作用。 0010 为解决上述技术问题， 本发明采用以下技术方案 说 明 书 1/35 页 3 CN 107837296 A 3 0011 治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 主要由以下药材制成 金边蚂蟥、 土元、 地龙 蚯蚓、 黄芪。 0012 上述治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 主要由以下重量份的药材制成 金 边蚂 蟥4-50份， 土元3-20份， 地龙5-40份， 黄芪10-80份。 0013 上述治疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 主要由以下重量份的药材制成 金 边蚂 蟥4份， 土元3份， 地龙5份， 黄芪10份。 0014 上述治疗中风病气虚血瘀证的复方中药是由药材和辅料制成的复方制剂。 0015 复方制剂为胶囊剂、 片剂或滴剂。 0016 胶囊剂为肠溶胶囊。 0017 肠溶胶囊按以下步骤制备 0018 金边蚂蟥抗凝血活性组分的提取 0019 取金边蚂蟥干体粉碎成粉， 过60目筛， 按质量体积比1 8-10加0.9氯化钠水 溶 液， 于4-8浸泡6h， 其间每30min搅拌1次， 然后粗滤， 滤液高速离心， 取离 心液用三氯乙酸 溶液调pH值至2.5， 8-10静置24h， 滤过， 滤液超滤， 收集浓 缩滤液， 溶液调pH值至7.0， 过 滤， 收集滤液， 冷冻干燥得金边蚂蟥干膏； 0020 土元、 地龙、 黄芪的提取 0021 取土元、 地龙打成粗粉， 加入黄芪饮片， 共同浸泡0.5h， 加水煮两次， 第一 次按质 量体积比1 8加水煮40min， 第二次按质量体积比1 6加水煮30min， 静置8h， 过滤， 合并滤 液， 浓缩， 干燥得土元、 地龙、 黄芪干膏； 0022 肠溶胶囊的制备 0023 取金边蚂蟥干膏过80目筛， 对倍法加入土元、 地龙、 黄芪干膏粉， 拌匀， 加 入适量 辅料淀粉， 制粒， 装肠溶胶囊， 即得蛭血通肠溶胶囊。 0024 步骤所得金边蚂蟥干膏的抗凝血活性为4000-6000u/g。 0025 步骤所得每粒肠溶胶囊内容物0.4g， 含金边蚂蟥抗凝血活性单位大于120 ATU。 0026 针对现有中风病治疗药物存在的问题， 发明人根据民间临床经验， 研制了一 种治 疗中风病气虚血瘀证的复方中药， 主要由以下药材制成 金边蚂蟥、 土元、 地龙、 黄芪。 该药 采用具有极强活血化瘀功效的广西特有的天然动物药金边蚂蟥 达到活血化瘀、 益气通络 功效。 大量的实验研究证明， 本发明具有明显的抗血栓 作用及体内抗凝血作用， 对微循环 障碍有显著改善作用， 对高脂血症有一定的降 血脂作用， 疗效确切。 据此， 发明人结合现代 科学制剂工艺制成了纯中药复方制 剂蛭血通肠溶胶囊， 由于抗凝血活性组分为多肽， 肠溶胶囊可以避免多肽在 胃内被消化酶破坏。 临床实践表明， 本发明治疗中风病气虚血瘀 证临床疗效好， 治愈率高， 应用方便， 安全性高， 无明显毒副作用， 不良反应少而轻， 未见出 现 出血、 血小板减少等严重毒副作用。 因此， 本发明在中风病中脏腑恢复期及后遗 症气虚 血瘀证治疗方面具有显著特色及领先优势， 低毒安全、 疗效显著， 具有广 阔的市场前景。 0027 蛭血通肠溶胶囊由金边蚂蟥、 土鳖虫、 地龙、 黄芪4味药组成。 0028 金边蚂蟥 壮药名堵平怀Duzbing vaiz。 功能 壮医调龙道， 散淤 血； 中医破 血通经， 逐瘀消癥。 0029 土鳖虫 壮药名堵兜老Duzdaeuhlaux。 功能 壮医通龙路， 化瘀消肿， 接骨止 说 明 书 2/35 页 4 CN 107837296 A 4 痛； 中医破血逐瘀， 续筋接骨。 0030 地龙 壮药名堵黏Duzndwen。 功能 壮医通调两路， 清热毒、 调气道； 中医清热 定惊， 通络， 平喘， 利尿。 0031 黄芪 壮药名黄芪Vangzgiz。 功能 壮医调气道、 水道， 升阳， 消肿， 固表止汗， 生津养血， 行滞通痹， 托毒排脓； 中医补气升阳， 固表止汗， 利水消 肿， 生津养血， 行滞通痹， 托毒排脓， 敛疮生肌。 0032 蛭血通肠溶胶囊方解 金边蚂蟥咸、 苦平， 土鳖虫咸、 寒， 两药均有通调龙 路火路、 通血栓的作用， 本方用其通调龙路火路、 通血栓的作用， 两药共为主药、 母药。 地龙， 咸， 寒； 通调龙路火路、 清热毒、 调气道； 黄芪甜、 微温， 补气虚、 强身体， 两药共凑帮药的作用。 诸药 配合用， 通调龙路火路、 散瘀、 补气通络的 功效， 中医谓之活血化瘀， 益气通络之功。 具体实施方式 0033 一、 蛭血通肠溶胶囊以下简称蛭血通胶囊或蛭血通的制备 0034 1.配方 金边蚂蟥4份， 土元3份， 地龙5份， 黄芪10份， 辅料淀粉适量。 0035 2.制法 0036 金边蚂蟥抗凝血活性组分的提取 0037 取金边蚂蟥干体粉碎成粉， 过60目筛， 按质量体积比1 8-10加0.9氯化钠水 溶 液， 于4-8浸泡6h， 其间每30min搅拌1次， 然后粗滤， 滤液高速离心， 取离 心液用三氯乙酸 溶液调pH值至2.5， 8-10静置24h， 滤过， 滤液超滤， 收集浓 缩滤液， 溶液调pH值至7.0， 过 滤， 收集滤液， 冷冻干燥得金边蚂蟥干膏金边 蚂蟥提取物； 测试抗凝血活性为4000- 6000u/g。 0038 土元、 地龙、 黄芪的提取 0039 取土元、 地龙打成粗粉， 加入黄芪饮片， 共同浸泡0.5h， 加水煮两次， 第一 次按质 量体积比1 8加水煮40min， 第二次按质量体积比1 6加水煮30min， 静置8h， 过滤， 合并滤 液， 浓缩， 干燥得土元、 地龙、 黄芪干膏； 0040 肠溶胶囊的制备 0041 取金边蚂蟥干膏过80目筛， 对倍法加入土元、 地龙、 黄芪干膏粉， 拌匀， 加 入适量 辅料淀粉， 制粒， 装肠溶胶囊， 即得蛭血通肠溶胶囊。 每粒肠溶胶囊内 容物0.4g， 含金边蚂 蟥抗凝血活性单位大于120ATU。 每天服3次， 每次服3-4粒。 二、 蛭血通胶囊的功能主治相关 的药效学试验 0042 1试验目的 0043 根据蛭血通胶囊的功能主治， 考察其防治血栓形成和抗凝的作用， 为其临床 用于 防治心血管疾病等提供实验依据。 0044 2实验材料 0045 2.1供试品 0046 参照一制备蛭血通胶囊批号140303， 实验用其内容物， 内容物为淡棕黄 色至棕 褐色的粉末； 气微腥， 味微苦。 保存温度 室温或4冰箱。 0047 2.2受试药物剂量及用法 0048 蛭血通胶囊内容物人临床每日拟用量 按成人3.123/60kg计算， 人日 拟用量为 说 明 书 3/35 页 5 CN 107837296 A 5 0.052g/kg/日。 0049 实验设正常对照组、 模型组、 阳性对照组、 蛭血通高剂量、 中剂量和低剂量 组 1.04g/kg/日、 0.52g/kg/日、 0.26g/kg/日， 每组动物10只， 灌胃给药。 0050 2.2试剂和仪器 0051 华法林 上海信谊九福药业有限公司， 批号 18140106D。 0052 盐酸肾上腺素 远大医药中国有限公司， 批号 140110 0053 胆固醇 成都市科龙化工试剂厂， 分析纯， 批号 2014060101 0054 猪胆盐 成都市科龙化工试剂厂， 生化试剂， 批号 20130503 0055 猪油 自制， 市场采购猪板油熬炼即得 0056 蛋黄粉 自制， 市场采购生鸡蛋带壳煮熟后取蛋黄， 60烘干后研碎即得 0057 辛伐他汀 成都恒瑞制药有限公司， 批号 130601 0058 台式低速大容量离心机， 上海安亭科学仪器厂， TDL-33 0059 电子天平 HANGPING JA1003型， 梅特勒-托利多上海天平仪器厂 0060 全自动生化分析仪 日立全自动生化分析仪， 7100型 0061 全自动血栓检测仪 郑州明举科技有限公司， 型号 LMK-12多环型 0062 2.3实验动物 0063 2.3.1动物 昆明种小鼠1822g， SPF级， 雌雄兼用， Wister系大鼠180220g， SPF 级， 雌雄兼用， 由广西医科大学医学实验动物中心提供。 试验动物生产许可 证 SCXK桂 2009-0002， 试验动物使用许可证 SYKG桂2009-0004。 0064 3试验方法选择 0065 根据蛭血通胶囊的功能主治， 按照新药临床前研究指导原则中有关药效学的 要 求， 进行了以下观察指标 0066 3.1蛭血通对大鼠静脉血栓的溶栓效应试验 0067 3.2蛭血通对大鼠体外血栓的影响试验 0068 3.3蛭血通对大鼠全血凝固时间CT、 部分凝血酶原时间APTT、 凝血酶原 时间 PT、 凝血酶时间TT的影响试验 0069 3.4蛭血通对小鼠微循环的影响试验 0070 3.5蛭血通对实验性大鼠高脂血症血脂的影响试验 0071 4统计方法 0072 采用华西医科大学卫生统计学教研室的 中国医学百科全书-医学统计学 统计 软件包第二版进行有关检验， 数据均以表示。 0073 5试验方法与结果 0074 5.1蛭血通胶囊对大鼠静脉血栓的溶栓效应试验 0075 取Wistet大鼠50只， 随机分成5组， 空白对照组， 华法林阳性对照组， 蛭血 通低、 中、 高剂量组， 每组10只。 蛭血通低剂量0.26g/kg、 中剂量0.52g/kg、 高剂量1.04g/ kg组， 华法林组0.4mg/kg， 空白组等体积蒸馏水连 续灌胃给药7天， 各组大鼠于末次 给药后1小时， 腹腔注射10水合氯醛300mg/kg 麻醉， 开腹分离下腔静脉， 于左肾静脉下 方用线结扎， 2小时后， 于结扎处下2cm 处结扎血管， 阻断血流， 记录血栓形成率， 取出血栓， 称血栓长度和湿重。 说 明 书 4/35 页 6 CN 107837296 A 6 0076 血栓形成率各组形成血栓的个数/各组总受试个数100 0077 实验结果显示， 蛭血通能降低大鼠血栓湿重， 减少血栓形成， 结果见表1。 0078 表1蛭血通对大鼠静脉血栓的溶栓效应 0079 0080 注 与模型组比较**P0.01 0081 5.2蛭血通对大鼠体外血栓的影响试验 0082 取大鼠50只， 随机分成5组， 空白对照组， 华法林阳性对照组， 蛭血通低、 中、 高剂 量组， 每组10只。 蛭血通低剂量0.26g/kg、 中剂量0.52g/kg、 高剂量1.04g/kg组， 华 法林组0.4mg/kg， 空白组等体积蒸馏水连 续灌胃给药7天。 各组大鼠于末次给药后1小 时， 腹腔注射10水合氯醛300mg/kg 麻醉， 开腹腹主动脉取血1ml， 放入聚己希管， 在 LMK-12体外血栓仪上旋转10分 钟15圈/分， 取出血栓， 在滤纸上吸干后量取血栓长度， 称 取血栓湿重。 将 血栓60烘干30min再称取重量， 即得血栓干重。 0083 实验结果显示， 蛭血通能缩短血栓长度、 降低血栓湿重和血栓干重作用， 结 果见 表2。 0084 表2蛭血通对大鼠体外血栓的影响 0085 0086 注 与正常组比较 *P0.05， **P0.01 0087 5.3蛭血通对大鼠全血凝固时间CT、 部分凝血酶原时间APTT、 凝血酶原 时间 PT、 凝血酶时间TT的影响试验 说 明 书 5/35 页 7 CN 107837296 A 7 0088 取大鼠50只， 随机分成5组， 空白对照组， 华法林阳性对照组， 蛭血通低、 中、 高剂 量组， 每组10只。 蛭血通低剂量0.26g/kg、 中剂量0.52g/kg、 高剂量1.04g/kg组， 华 法林组0.4mg/kg， 空白组等体积蒸馏水连 续灌胃给药7天， 各组大鼠于末次给药后1小 时， 尾巴取血， 采用挑丝法测定大鼠 全血凝固时间CT， 腹腔注射10水合氯醛300mg/ kg麻醉， 开腹腹主动脉 取血2ml放入枸橼酸钠抗凝管中， 于广西医科大学第一附属医院测 定APTT、 PT、 TT。 0089 实验结果显示， 蛭血通延長大鼠CT、 PT时间， 结果见表3。 0090 表3蛭血通对大鼠APTT、 PT、 TT、 CT的影响 0091 0092 0093 与空白组相比较， P0.05 0094 5.4蛭血通对小鼠微循环的影响试验 0095 取KM小鼠60只， 雌雄各半， 随机分成6组 空白对照组， 模型对照组， 华法 林阳性对 照组， 蛭血通低、 中、 高剂量组， 每组10只。 蛭血通低剂量0.26g/kg、 中剂量0.52g/kg、 高剂量1.04g/kg组， 华法林组0.5mg/kg， 空白组 和模型组等体积蒸馏水连续灌胃给 药5天。 各组小鼠末次给药后1h， 腹腔注 射10乌拉坦0.12ml/10g麻醉小鼠， 将动物俯卧 于微循环的观察台上， 平展 耳廓并滴少许石蜡油使之固定于载玻片上， 再覆盖玻片， 然后 将观察台置于显微 镜载物台上， 调节光源至适当亮度， 在透射光下用104倍镜观察小鼠 耳廓微 循环， 然后尾静脉注射0.01盐酸肾上腺素注射液5ml/kg体重造成小鼠微循环障 碍模型， 再次观察小鼠耳廓微循环在造模后15min的变化， 分别记录动脉血流速 度， 用显微 测微尺测量耳廓细动脉A和细静脉V的血管口径， 计算造模 前后的变化率。 计算公式 0096 动脉血流速度变化率造模前动脉血流速度-造模后15min/造模前 100 0097 静脉血流速度变化率造模前静脉血流速度-造模后15min/造模前 100 0098 动脉血流量变化率造模前动脉血流量-造模后15min/造模前100 0099 实验结果显示， 蛭血通能降低小鼠耳廓动脉血流速度变化率、 静脉血流速度 变化 率、 动脉血流量变化率， 缓解小鼠耳廓动静脉血管管径的缩小， 结果见表4、 5。 0100表4小鼠造模前后动静脉血流速度变化率、 动脉血流量变化率n10 说 明 书 6/35 页 8 CN 107837296 A 8 0101 0102 0103 注 与空白组比较， *P0.05， **P0.01 0104表5小鼠造模后耳廓动静脉血管口径n10 0105 0106 注 与空白组比较， *P0.05， **P0.01 0107 5.5蛭血通对实验性大鼠高脂血症血脂的影响试验 0108 5.5.1高脂饲料的配制 0109 基础饲料82.9， 胆固醇1， 猪胆盐0.1， 猪油12， 蛋黄粉4。 按比例先将 胆 固醇、 猪胆盐、 蛋黄粉研碎混合， 然后加入温热的猪油中， 再与基础饲料拌匀 即得。 0110 5.5.2高脂血症模型建立及分组 0111 选取70只健康SD大鼠， 体重20020g， 雌雄各半。 适应性饲养7天后， 随机 抽取10 只作为空白组， 雌雄各半， 实验全程喂饲基础饲料。 其余60只大鼠喂饲高 脂饲料4周， 诱导 建立饮食性高脂血症大鼠模型。 4周后禁食不禁水12h， 于次日 眼内眦采血2ml， 制备血清， 测定各大鼠的TC、 TG、 HDL-C、 LDL-C水平， 与空白 组的血脂水平进行比较， 确定造模是否成 说 明 书 7/35 页 9 CN 107837296 A 9 功。 造模成功后， 将50只高脂血症大鼠 按TC水平随机分成5个组 随机分为模型组， 辛伐他 汀组5.0mgkg-1d-1， 蛭血通高1.04gkg-1d-1、 中0.52gkg-1d-1、 低 0.26gkg-1d-1 剂量组， 每组10只， 雌雄各半。 灌胃给药， 空白组和模型组给予等剂量 的蒸馏水。 同时按照上述方法给予高脂饲料或基础饲料， 持续3周。 灌胃3周后， 禁食不 禁水12h， 眼眦取血2ml。 4静置10min， 3000pr/min离心15min， 分离血清， 用 全自动生化仪 检测TC、 TG、 HDL-C、 LDL-C水平。 0112 实验结果显示， 蛭血通低剂量组能显著降低胆固醇、 高密度脂蛋白和低密度 脂蛋 白的含量， 蛭血通中、 高剂量组对高脂血症大鼠有一定的降血脂作用， 但无 统计学意义， 结 果见表6。 0113 表6蛭血通对高血脂大鼠血脂的影响n10单位 mmol/L 0114 0115 注 与空白组比较*P0.05， **P0.01， 与模型组比较P0.05， P0.01 0116 6试验结论 0117 蛭血通胶囊对大鼠静脉血栓模型和体外血栓模型的有抑制作用， 能降低大鼠 血 栓湿重， 减少血栓形成， 缩短血栓长度、 降低血栓湿重和血栓干重。 试验结果 证明， 蛭血通 对血栓形成有明显的防治作用。 0118 蛭血通胶囊对大鼠凝血功能有作用， 对大鼠CT、 PT有延长。 试验结果证明， 蛭血通 对大鼠有一定抗凝血作用。 0119 蛭血通胶囊对小鼠耳廓微循环障碍有显著改善作用， 能降低小鼠耳廓动脉血 流 速度变化率、 静脉血流速度变化率、 动脉血流量变化率， 缓解小鼠耳廓动静脉 血管管径的 缩小。 说明蛭血通胶囊有改善血管微循环作用。 0120 蛭血通胶囊对大鼠高脂血症有一定的改善作用， 其低剂量组能显著降低胆固 醇、 高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的含量， 蛭血通中、 高剂量组对高脂血症大鼠 有一定的降血 脂作用， 但无统计学意义。 说明蛭血通对高脂血症大鼠的血脂有一 定改善作用。 0121 三、 蛭血通肠溶胶囊毒理学急性毒性实验研究 0122 1专题名称 0123 昆明小鼠灌胃蛭血通肠溶胶囊内容物单次给药毒性试验。 0124 2实验目的 说 明 书 8/35 页 10 CN 107837296 A 10 0125 通过给ICR小鼠一日内灌服最大浓度最大体积的受试药物， 观察该药物对动 物产 生的毒性反应、 中毒程度、 性质、 恢复情况及死亡分布， 为临床用药安全提 供可靠依据。 0126 3材料与方法 0127 3.1供试品 0128 蛭血通胶囊批号140303， 实验用其内容物， 内容物为淡棕黄色至棕褐色 的粉 末； 气微腥， 味微苦。 保存温度 室温或4冰箱。 3.2实验系统 0129 动物种系 昆明小鼠。 动物级别 SPF级。 共40只、 雌雄各半。 动物体重 18-20g。 动 物来源 广西医科大学实验动物中心， 生产许可证号 SCXK桂 2009-0002。 0130 3.3实验设计 0131 采用标准 国家食品药品监督管理局颁布的 药品注册管理办法 附件1 中药、 天然药物注册分类及申报资料要求 、中药、 天然药物急性毒性研究 技术指导原则 和 药 品非临床研究质量管理规范 。 0132 3.4实验方法 0133 根据预试验结果， 拟采用最大给药量法进行供试品单次给药毒性试验。 将40 只昆 明小鼠分成1个给药组及1个对照组， 每组20只动物、 雌雄各半。 对照组给予 与给药组相同 体积的蒸馏水。 0134 表7试验剂量与分组表 0135 0136 供试品给予途径和次数 灌胃。 给药体积 0.6ml20g-1体重。 给药速度 匀速。 0137 给药期限 当日给药1次。 0138 供试品配制 准确称一定量的供试品， 加入蒸馏水适量溶解后使用， 临用新 配。 0139 供试品的给予 用一次性注射器1ml体积准确抽取药液， 标准灌胃操作。 0140 观察、 检验、 分析和测量的指标与次数 一日内给药1次， 连续观察14天， 0141 密切观察动物在给药后48h内的反应。 详细记录动物出现毒性反应情况， 中 毒症 状、 中毒症状出现时间、 持续时间、 恢复时间及动物最短死亡时间、 最长死 亡时间、 平均死 亡时间和死亡动物数， 死亡动物及时解剖尸检， 其中肉眼观察异 常动物进行病理组织学检 查。 实验过程中于动物接收24h、 检疫期结束后称体重， 及时剔除体重不合格的动物； 禁食 16h后称体重并随机分组； 于给药后第d3、 d7、 d11、 d14称体重。 0142 观察期结束时存活动物称体重后处死并进行解剖检查 观察心脏、 肝脏、 肾、 脾、 肺及胃肠等脏器的变化， 如有明显改变进一步进行病理检查。 实验结果评价 按SOPT205A进 行。 0143 笼旁观察结果见表8。 给药后至观察期14天结束， 空白对照组及给药组动物 行为 活动及体征表现均正常， 且无一死亡。 说 明 书 9/35 页 11 CN 107837296 A 11 0144 体重结果见表9、 10。 各给药组动物体重在给药后14天内与对照组无显著差 异。 0145 表8给药后动物出现毒性反应的情况 0146 0147 0148 注“-” 为无毒性反应；“” 为有毒性反应； 0149表9雌性小鼠给药前后体重变化 0150 0151 0152 0153 大体解剖结果见表11、 12。 试验结束后， 给药组和对照组动物经大体解剖所 见 心 脏、 肺脏、 肝脏、 脾脏、 肾脏和胃肠， 诸脏器均未发生异常改变。 说 明 书 10/35 页 12 CN 107837296 A 12 0154 表11雌性小鼠脏器改变 0155 0156 表12雄性小鼠脏器改变 0157 0158 0159 结论 0160 一日内两次给昆明小鼠灌胃高于临床剂量相当于原生药量22g约577倍的 30.0gkg-1蛭血通肠溶胶囊内容物后， 即刻至整个观察期过程中未见动物出现 任何不良 反应及死亡。 认为该供试品给小鼠经灌胃给药的LD50剂量大于最大给药 剂量30.0gkg- 1。 0161 四、 蛭血通肠溶胶囊毒理学長期毒性实验研究 0162 目的 通过给大鼠长期大剂量的蛭血通肠溶胶囊内容物灌胃后， 观察由于蓄 积而 对动物机体产生的毒性反应、 严重程度及性质， 提供毒性反应的靶器官及其 损害的可逆 性， 确定无毒反应剂量， 为保障临床用药的安全性提供科学详实的试 验依据。 0163 方法 将80只SD大鼠随机分成空白对照组和三个供试品组， 每组20只， 雌雄 各半。 选用1.04gkg-1、 2.08gkg-1、 4.16gkg-1蛭血通肠溶胶囊内容物 作为本次实验的给 药剂量， 剂距1 2。 每天灌胃给药1次， 每周7天， 连续灌胃给 药90天， 对照组灌胃等体积的蒸 馏水。 每日观察动物自主活动、 精神状态、 皮毛、 粪便情况； 每周称量体重、 记录摄食量。 给 药结束后， 每组雌雄各取7只动物， 进行血液学、 血生化及电解质等各项指标检测； 解剖取 脏器进行称重， 计算脏器 系数； 并进行病理组织学检查。 于恢复期结束时， 每组雌雄各取3 只动物， 用同 样方法取血、 剖杀， 进行与给药结束时相同的各项检查。 0164 结果 1.一般临床表现给药期至恢复期结束， 各实验组动物行为活泼， 自 主活动 说 明 书 11/35 页 13 CN 107837296 A 13 规律， 外观体征、 皮肤、 粘膜及粪便颜色形态正常， 腺体无异常分泌物， 且无一死亡。 2.体重 与进食量在整个实验过程中， 各给药组大鼠的体重、 进食 量等指标均未见与药物相关的异 常降低趋势， 变化值均属正常范围内的波动。 3. 临床病理学检验所见血液学检测结果显 示 本实验中各时期检测数据显示， 在给 药90天后， 雌性大鼠高剂量组的红细胞平均体积 MCV、 中性粒细胞比率NEUT 低于对照组， 红细胞平均血红蛋白浓度MCHC、 淋巴细胞 比率LYMPH高于 对照组； 低剂量和中剂量组的嗜酸性粒细胞比率EO低于对照组。 恢复期结 束后， 雄性大鼠低剂量组的红细胞计数RBC、 血红蛋白HGB低于对照组； 中剂 量组红细胞平均血红蛋白浓度MCHC、 血小板压积PCT低于对照组。 因检测值未超出正 常值范围， 且无剂量及时效的相关性， 故不认为与药物作用有 关， 不具有毒理学意义。 血液 生化检测结果显示 给药结束时， 雌性大鼠中剂量 组总胆红素TBIL低于对照组， 因检测 值未超出正常值范围， 且无剂量及时效 的相关性， 故不认为与药物作用有关。 总蛋白TP、 氯离子Cl、 钠离子Na 的改变虽然具有统计学差异， 并具有剂量相关性， 但基于这些变 化并未超出大鼠 的正常生理值范围， 因此不具有毒理学意义。 雄性大鼠低剂量组的甘油三 酯TG 高于对照组， TP低于对照组， 因检测值未超出正常值范围， 且无剂量及时效的相 关 性， 故不认为与药物作用有关。 恢复期雌性大鼠肌酐CREA低于低剂量组； 雄性大鼠中剂 量组球蛋白GLB高于低剂量组， A/G低于对照组， 但属于正常范 围内波动， 不具有毒理学 意义。 本次血液生化指标的变化值与本机构的测试背景 资料数据相符， 可认为上述改变属 正常生理范围的波动， 而并无毒理学意义。 在 试验各阶段中， 三个剂量组的网织细胞计数 及脏器系数检查均未见与供试品相关 的病理性改变。 4.组织病理学结果所见 在试验各时 期， 各组均有个别动物出现 肾脏和肺脏的间质性炎症及前列腺炎症， 以上现象实属大鼠常 见的自发性病变， 并无毒理学意义， 且对照组与给药组间的发生率和病变程度无明显差 别， 与给予 受试物无明显相关性。 0165 结论 在本试验条件下， 连续给SD大鼠灌胃蛭血通肠溶胶囊内容物90天， 各 给药 组动物的诸项生理指标均未出现因药物引起的毒性反应和与给药相关的病 理改变。 经停 药3周的观察， 各项检测指标也均未显现出因给药而引发延迟毒性 或蓄积性毒性反应。 器 官组织的病理改变与给药相关性分析认为 在试验的各时 期， 均未发现与给予受试物相关 的病理改变。 本次实验蛭血通肠溶胶囊内容物的 无毒性反应剂量为4.16gkg-1。 0166 五、 蛭血通肠溶胶囊临床试验研究 0167 经广西食品药品监督管理局批准， 蛭血通肠溶胶囊经由验证医院分别对中风 病 气虚血瘀证进行了临床验证。 0168 一试验背景 0169 蛭血通肠溶胶囊处方组成 金边蚂蟥、 土元土鳖虫、 地龙、 黄芪四味药。 0170 功能主治 0171 壮医通调龙路火路、 通血栓、 补气通络。 用于治疗麻邦中风。 0172 中医活血化瘀， 益气通络。 用于中风病中经络气虚血瘀证、 中风病中脏 腑恢 复期及后遗症半身不遂气虚血瘀证的患者， 表现为半身不遂， 肢体偏瘫不用， 肢体麻木， 言 语不利， 口舌斜等。 0173 为进一步评价本发明蛭血通肠溶胶囊的有效性与安全性， 根据 药品注册管 理办 法 、药物临床试验质量管理规范 以及蛭血通肠溶胶囊的处方及功能主 治， 把蛭血通肠 说 明 书 12/35 页 14 CN 107837296 A 14 溶胶囊拟定功能主治， 应用于临床试验并考察疗效， 总结其有效 性与安全性， 规范并指导 蛭血通肠溶胶囊在今后的临床中合理应用。 0174 二立题依据 0175 1 药品注册管理办法 2007 0176 2 药物临床试验质量管理规范 2003 0177 3 中药新药临床研究指导原则 2015年版附件3-中