HOBt中含有这些基因毒性杂质

HOBt：1-羟基苯并三氮唑，是一种常用于酰胺缩合中的催化剂。

HOBt在缩合反应中优点明显：

• 极大提高反应收率

• 减少副反应产生

• 减少消旋化作用

由于这些显而易见的优势，文献中检索到超过600万个反应都可以见到HOBt的身影。

不过HOBt有时会带来一些麻烦，就是会引入一些基因毒性杂质，然而最大的麻烦是经常会忽略掉这些麻烦。

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在合成化合物3的工艺中，筛选出最佳反应条件，一锅合成，纯度完美。

在考察不同用量的HOBt对反应的影响时，发现一些之前未发现的杂质4和5。

显然这些杂质是肼引起，而肼的来源为HOBt。

HOBt的合成中使用了肼：

除了肼外，另外一个起始物料氯代硝基苯也具有潜在的遗传毒性。

HOBt中出现的肼除了起始物料引入外，也有可能是本身降解产生。因此设计了一些实验：

10和11对比，10使用的HOBt会产生0.22%的杂质4；11中将同样的HOBt使用水结晶，发现杂质4明显降低，说明肼不会在反应中产生。

实验12将实验1中的HOBt储存12个月，发现杂质4没有增长，说明HOBt不会降解产生肼。

因此HOBt中的肼来自起始物料的污染。

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之后评估了不同API的日剂量，计算出肼的最小限值为75ppm，氯代硝基苯为150ppm。

通过和苯甲醛反应衍生化LC-MS方法进行了定量，发现市售的HOBt质量不一：

22批次中有6批次超过限值。

由于HOBt在制药行业的广泛使用，应该注意其中的肼以及由肼可能引起的副反应。

参考文献：Mutagenic Impurities in 1‑Hydroxybenzotriazole (HOBt)

DoI:10.1021/acs.oprd.9b00376