Cre转基因小鼠制备技术方法

Cre酶是在噬菌体内发现的一种酶，它能特异性的识别LoxP序列，并把同方向排列的两个LoxP序列之间的DNA切掉。

前面说了，我们把LoxP序列放到了打算敲除基因的两侧，那么我们如果把Cre酶放到细胞核里，目的基因就被Cre酶切掉，从而实现目的基因敲除了。

于是人们制作了能够表达Cre酶的转基因小鼠。

把Cre转基因小鼠和插入了LoxP序列的小鼠交配，就可以得到同时携带Cre和LoxP序列的小鼠了。

当Cre在细胞核内遇见LoxP序列，目的基因就被敲除了。

想控制在哪个细胞或者什么时间敲除目的基因，只要控制Cre酶就可以了。

制作Cre转基因小鼠时在Cre酶前面放上特异性的启动子，那么Cre酶就在该启动子表达的细胞或组织内表达，这样就只有这个组织或细胞内的目的基因被敲除。

时间上控制基因敲除的方法更为巧妙。人们修饰了Cre酶基因，修饰后的Cre基因可以转录为mRNA，也可以在核糖体上翻译为蛋白质。

但是这种蛋白没有穿过细胞核膜的能力，也就无法进入细胞核发挥切割DNA序列的功能。

当人们外源性给予药物他莫昔芬（tamoxifen，缩写TM，是雌激素类似物）后，修饰的Cre酶就会获得穿过细胞核膜的能力。

于是Cre进入细胞核，与基因组相遇，切割掉LoxP之间的序列。

于是人们实现了什么时候给药，什么时间敲除基因（当然得给Cre一点时间穿过细胞核膜）。

需要注意的是，Cre是一种酶，那么和所有酶一样，它的作用效果不会是百分之百的。

也许100个细胞里表达了Cre，大约70个细胞内的基因被敲除。