PCR实验结果总不对？耗材是个坑！ / 四六文摘

“众所周知，PCR是生化实验室基本的实验方法。”实验结果却总是不尽如意，有可能是PCR塑料耗材微量的污染，或者是抑制剂的引入造成的实验干扰。还有一个很重要的原因：耗材选择不当也会对实验结果造成很大的影响。

影响PCR实验结果得原因有很多：通常有以下7种。

1、引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度；

2、酶及其浓度；

3、dNTP的质量与浓度；

4、模板（靶基因）核酸；

5、Mg2+浓度；

6、温度与时间的设置；

7、循环次数；

8、设备、耗材等。

在众多影响因素中，耗材是一个非常重要、也极容易被忽视的因素之一。

PCR耗材类型众多：8连管、低容管、标准管、无裙边、半裙边，全裙边，升孔缘等一系列的PCR及qPCR板，选择起来非常困难，在这中间存在许多具有共性的问题，小析姐对这些问题进行了汇总。我们一起来看看大家在选用PCR耗材时都遇到了哪些问题，又该如何解决呢？

常见问题及解决办法

一、PCR耗材为什么一般都是PP材质的呢？

答：PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯（PP）材质，因其为生物学惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有着良好的化学耐性，及温度耐受性（可121度高压灭菌，也可以承受热循环过程中的温度变化）。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触，因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。

二、不同体积的PCR 管/板，我该怎么选呢？

答：PCR管的体积大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上，优先推荐选用低容管哦。因为低容反应管/板有着较小的上方空间，可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时，需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降，溢出及交叉污染，而加样过少可能会造成样品蒸发损失。大家可依据具体的实验要求选用更合适的产品。

常见反应管规格及体积：

单管/联管：0.5mL，0.2mL， 0.15mL

96孔板：0.2mL， 0.15mL

384孔板：0.04mL

三、为何有的PCR管是平盖，有的是凸盖呢？

答：当样品量较少时，都会优先选用单管或者连管。但是当反应体积需求较大时，单管可达到0.5mL呢。平盖和凸盖各有优点呢，可参考下面的信息。