FLEX条件性表达载体（Cre-Switch）是什么？

哺乳动物细胞和动物中，该常规质粒FLEX（Flip-Excision）条件性基因表达载体系统Cre-switch，通过Cre重组酶条件性控制两个ORF的表达。FLEX Cre-switch系统利用位于两个平行反向ORF两侧的Lox-变体重组位点，在Cre重组酶的调控下失活一个目的基因的表达，而激活另一个目的基因表达。

FLEX Cre-switch系统由两对异型Lox-变体重组位点组成，其中野生型序列称为LoxP，突变体称为Lox2272，分别位于两个基因ORF的两侧。 两个ORF相互反向，其中一个ORF具有正确的读码方向（相对于启动子）。两种Lox-变体都可被Cre识别，但只有相同的Lox位点对可以彼此重组，与其他Lox-变体不能进行重组。LoxP和Lox2272位点以交替方式位于两个ORF两端，每对位点互为反向。Cre重组酶不存在的情况时，第一个ORF由于其编码方向与启动子方向相同，可以在客户定制的启动子驱动下正常表达，而第二个ORF由于其方向相反则无法正常表达。在Cre的存在下，LoxP和Lox2272位点对分别重组，导致两个ORF方向反转，且其中的一对重组位点将具有相同的方向，Cre会介导产生正向重组切割，继而分别留下一个不同的重组位点。 ORF方向的反转，使得第二个OR可以在启动子的驱动下正常表达，而第一个ORF将不表达。 由于ORF侧翼是两个不同的Lox-变体位点，所以即使存在Cre也不会进一步发生重组。

虽然该载体系统可用于组织培养细胞，但它更适用于制备转基因动物。 携带这种载体的转基因动物起初会表达第一个ORF基因，当与携带组织特异性Cre的转基因动物杂交时，在携带两种载体的后代转基因动物中，特别是在表达组织特异性Cre的细胞中，第二个ORF将会被激活表达，而第一个ORF的表达将会失活。

抗性筛选或荧光基因可以添加到该载体中，以便于通过药筛或者荧光筛选出永久整合外源基因的细胞。