组织学技术 染料与染色1
染料与染液
一、染料
（一）细胞核染料
天然染料：苏木精、卡红、巴西木素等
合成的煤焦油染料：硫堇、甲苯胺蓝、中性红、沙黄、碱性品红等。需加媒染剂促进组织与染料结合的称媒染染料，如天青石蓝、核坚牢红、没食子酸青、酸性茜素蓝等。
1 苏木精（Haetoxylin）（苏木紫、苏木素）
从苏木用乙醚连续撮的淡黄色或棕黄色结晶
溶于酒精、甘油和热水
需加氧化剂或复盐才能成为染液
促使苏木精氧化的方法：
配制时加氧化剂加速成熟：高锰酸钾、碘酸钠、氧化汞、过氧化氢（双氧水）
在空气中自然氧化成熟
使用方式:
氧化剂和苏木精一起配制
切片先浸泡于媒染剂（复盐如铁明矾），再用自然成熟的苏木精染色，最后用复染分化
用途:
细胞核染色；线粒体、髓鞘、肌原纤维等染色
常用的苏木精染液
Delafield苏木精染液
苏木精4克溶于无水酒精25毫升
倒入10%铵明矾水溶液400毫升，放有光处3~4天，过滤
加甘油、甲醇各100毫升
数日后过滤。能长久保存
染色数分钟。也可稀释500~100倍，染4~24小时。
对细胞核和嗜碱性颗粒染色效果良好
Ehrlich苏木精染液
苏木精2克溶于95%酒精100毫升，加蒸馏水及甘油各100毫升，钾明矾3克，冰醋酸10毫升，溶液呈红色。用纱布封闭瓶盖，两周后成熟，溶液呈暗红紫色
切片染数分钟
适合块染，需用蒸馏水或50%酒精稀释4~5倍，小块组织染1~2天
Harris苏木精
10%钾明矾水溶液200毫升（煮沸加热溶解），倒入10%苏木精95%或无水酒精溶液10毫升，继续加热煮沸1分钟，停火，缓慢加氧化汞0.5克，加热煮沸1分钟，冷水冷却
加冰醋酸6~10毫升可增强细胞核着色能力
切片染3~10分钟
不适合块染
Mayer酸性苏木精明矾染液
苏木精1克，加入蒸馏水100毫升，碘酸钠0.2克，钾明矾50克
加温溶解，溶液呈蓝紫色。
加水合氯醛50克、枸橼酸1克，溶液呈红紫色。能长久保存
切片染色4~6分钟，小块组织染24小时。
陈液着色力强，可用2%钾明矾水溶液适当稀释。染后用流水洗至细胞核呈深蓝色
Mayer钾矾苏木红染液
苏木红1克与95%酒精混合，加温溶解，加5%钾明矾水溶液100毫升，加樟脑少许防腐
Hansen铬明矾苏木精
铬明矾10克溶于蒸馏水250毫升，煮沸至溶液呈绿色
苏木精1克溶于蒸馏水15毫升，倒入上液，充分摇荡混合
加入10%硫酸（2N）5毫升
重铬酸钾0.552克溶于蒸馏水20毫升，倒入上液，煮沸1~2分钟
冷却后过滤
染30秒至5、6分钟，细胞核呈蓝黑色，不过染，不易褪色
硫酸量1~3毫升，使细胞浆着色，可染神经元尼氏体（虎斑）
Weigert铁苏木精
用时配制，不能保存
A液：1%苏木精95%酒精 溶液10毫升
B液：29%氯化铁水溶液4毫升，盐酸（25%）1毫升，蒸馏水95毫升
（ 氯化铁1.16克溶于蒸馏水98毫升，加盐酸1毫升）
用时将A、B液等量混合，染数分钟
肠系膜铺片铁明矾苏木精染色法
⑴铺片固定于酒精甲醛醋酸液或Zenker液30~60分钟，水洗1小时（含汞固定者脱汞）
⑵2~4%铁明矾水溶液媒染2~4小时（冬天37℃温箱），蒸馏水速洗两次
⑶苏木精液染色4~8小时（37℃温箱1~2小时），流水洗
苏木精液：10%苏木精无水酒精100毫升加甘油5毫升，数周后使用。用时取5~10毫升加蒸馏水至100毫升
⑷入2~4%铁明矾水溶液分色至细胞核蓝色，胞质淡灰蓝色，
⑸流水充分洗涤，浸泡于水中5分钟
⑹0.5%复制伊红酒精溶液或1%荧光桃红水溶液复染3~5分钟
⑺95%酒精 分色，无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片
结果：成纤维细胞和巨噬细胞核蓝色；胞质灰至灰蓝色
Heidenhain铁苏木精染色法
Regaud铁苏木精染色法
磷钨酸（磷钼酸）苏木精
Mallory磷钨酸苏木精
苏木精10克，蒸馏水100毫升，磷钨酸2克，溶解后加新鲜过氧化氢0.2毫升或0.25%高锰酸钾水溶液10毫升
切片染12~24小时，流水冲洗
Mallory磷钨酸苏木红（Hematein)或苏木精染色法
苏木红0.5克溶于蒸馏水100毫升；磷钨酸5克溶于蒸馏水400毫升。二液混合，密封，24小时后再用。
配好就用，使用不长
苏木精0.5克溶于蒸馏水100毫升；
磷钨酸10克溶于蒸馏水400毫升
二液相混，加0.25%高锰酸钾水溶液25毫升
24小时后使用 ，一周左右效果最好，不能长期使用
苏木精0.5克溶于蒸馏水100毫升
磷钨酸5克溶于蒸馏水 400毫升
混合后1~2月使用，能长期使用。
Mallory磷钨酸苏木红（苏木精）染色法
⑴组织固定于Zenker或Helly液，常规脱水、石蜡包埋，切片6微米以下。
⑵切片经 二甲苯脱蜡，经酒精下行至水。
⑶用碘和硫代硫酸钠脱汞，充分水洗。
⑷入0.25%高锰酸钾水溶液5分钟或0.5%高锰酸钾水溶液50毫升加3%硫酸水溶液2.5毫升1分钟，水洗
⑸1%草酸水溶液漂白5~20分钟或5%草酸水溶液5~20分钟
⑹流水冲洗1~2分钟
⑺磷钨酸苏木精染色12~24小时
⑻95%酒精 快速分色，无水酒精或丙酮及无水酒精二甲苯等量混合液脱水，二甲苯透明，封片
结果：肌组织蓝色；骨骼肌横纹特别清晰；肌上皮细胞蓝色；胶原纤维紫红色；红细胞蓝色
2 卡红：细胞核染色
3 伊红：细胞质，胶原纤维、肌纤维
4 硫堇 弹性纤维，肥大细胞
5 甲苯胺蓝 肥大细胞
6 、中性红
7 沙黄 ：肥大细胞；番红固绿染色
8 碱性品红：醛品红
9 酸性品红：VanGieson液
10 焦油紫：尼氏染色
11 结晶紫：
12 甲基紫
13 派洛宁
14 甲基蓝（美蓝）
15 亚甲基蓝（次甲基蓝）
16天青Ⅱ伊红
金属染料：硝酸银
二、染液
三、染色方法
（一）苏木精-伊红染色法
脑垂体Delafield苏木精-伊红染色法
⑴人或猪脑垂体固定于Zenker液或10%甲醛液，常规石蜡包埋切片。
⑵切片脱蜡入蒸馏水。
⑶入Delafield苏木精原液3毫升加蒸馏水50毫升37℃1小时，流水冲洗至切片呈蓝色，蒸馏水洗。
⑷入 0.5%伊红水溶液染3~5分钟。
⑸脱水，透明，树胶封片。
结果：嗜酸性细胞红色，嗜碱性细胞深蓝色，细胞核蓝色，嫌色细胞无色。
Zenker液固定较佳，其它则颗粒 不很清晰。
地衣红-苏木精-伊红染色法
⑴人、狗、猪脑垂体用Helly液或Zenker液固定8~12小时，石蜡切片6~7微米。
⑵切片脱蜡经各级酒精至30%酒精。
⑶入改良Preiter硝酸地衣红液染2~4小时或于37℃染1~2小时。
地衣红 0.5克，80%酒精98毫升，硝酸2毫升
⑷80%酒精分色5~10分钟。
⑸切片下行至水。
⑹苏木精染8~10分钟，水洗。
⑺盐酸酒精分色 ，流水冲洗，蒸馏水洗。
⑻0.5%伊红液复染5~10分钟，。
⑼脱水，透明，封片。
结果：
嗜碱性细胞呈棕褐色，嗜酸性细胞 亮红色，嫌色细胞灰红色，胶原纤维淡红色，弹性纤维棕褐色。
（二）铁苏木精染色法
Weigert铁苏木精染色法
Heidenhain铁苏木精染色法
Regaud铁苏木精染色法
（三）地衣红染色法
（四）Gomori染色法
Gomori醛品红法（弹性纤维）
Gomori镀银法（网状纤维）
Gomori钙钴法（碱性磷酸酶）
Gomori铅法（酸性磷酸酶）
（五）Von Gieson染色法
（六）Mallory染色法
（七）尼氏染色法
（八）镀银法
玻璃器皿要用洗液浸泡。
溶液的配制：多用百分比浓度。
1%硝酸银水溶液，硝酸银1克溶于蒸馏水100毫升
超过10%浓度：溶剂相对减少。10%硝酸银水溶液，硝酸银10克，蒸馏水90毫升。40%氢氧化钠，氢氧化钠40克，蒸馏水60毫升
硝酸银溶液应清澈透明。
夹切片不用金属镊。塑料镊或金属镊沾溶蜡
脱钙骨镀银法
⑴新鲜骨组织固定于10%甲醛液，脱钙：
5%硝酸水溶液100毫升，甲醛5毫升；脱2~3天；水洗；硫酸钠中和。
⑵切片，脱蜡下行至水。
⑶蒸馏水洗5~10分钟。
⑷入1%硝酸银水溶液10~30分钟（暴露于阳光）。
⑸蒸馏水洗30~60秒。
⑹入5%硫代硫酸钠水溶液3分钟。
⑺蒸馏水充分洗涤。
⑻1%中性红或沙黄水溶液复染，蒸馏水略洗。
⑼入95%酒精分色及无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
结果：骨质呈棕黑色，细胞核呈红色。
注：脱钙骨镀银后，可用Cajal还原液或10%甲醛液还原；银液曝光以显棕黑色为度；亦可用Van Gieson液复染（1%酸性品红，苦味酸饱和水溶液）。
Von Kossa镀银改良法
方法：
⑴骨组织厚2毫米以下，固定于80%酒精或10%甲醛液。甲醛固定者固定24小时以上须用蒸馏水洗多次。
⑵2%硝酸银水溶液暗处浸2~4天，蒸馏水洗3次（每次20秒），流水冲洗4小时。
⑶还原液2天，流水冲洗1小时。
还原液：硫代硫酸钠5克，0.05N氢氧化钠 0.2毫升，蒸馏水100毫升
⑷5%硫代硫酸钠水溶液24小时，流水冲洗1小时。
⑸5~10%甲酸液脱钙，水洗。
⑹脱水，常规石蜡包埋，切片8~10微米。
⑺切片脱水，透明，封片。
结果：骨陷窝、骨小管呈黑色，类骨质红色。
Cajal硝酸铀染色法
⑴断头或击延髓致死动物，取新鲜组织固定，蒸馏水速洗。
神经系统A液：硝酸铀1克，蒸馏水80毫升，甲醇或无水酒精20毫升，甲醛15~20毫升
其它脏器如肝、胰B液：硝酸铀1克，蒸馏水80毫升，不加甲醛或无水酒精
⑵入1.5%硝酸银水溶液36~48小时（棕色广口瓶），蒸馏水速洗。
⑶入还原液8~24小时，蒸馏水速洗。
还原液：对苯二酚1~2克，甲醛15毫升，蒸馏水100毫升
⑷各级酒精快速脱水，苯或二甲苯透明，石蜡包埋。
⑸切片8~10微米，粘片、烤片。
⑹切片脱蜡，封固。
结果：高尔基复合体棕黑色，细胞核无色，背景黄色。
如用Babes沙黄液染细胞核15分钟至数小时，核呈黄色。
Babes苯胺沙黄染色法：
沙黄2~3克，2%苯胺油水溶液100毫升，加温溶解，冷后过滤。能用一个月。切片染色24小时。
Da-Fano改良Cajal镀银法
⑴取新鲜组织固定于硝酸钴液6~18小时，蒸馏水洗两次。
固定液：硝酸鈷1克，蒸馏水100毫升，甲醛15毫升（胚胎组织6~10毫升）
⑵入1.5%硝酸银水溶液18~21℃暗处24~48小时，蒸馏水洗。
⑶入还原液8~24小时，蒸馏水速洗。
还原液：对苯二酚1~2克，甲醛15毫升，蒸馏水100毫升
⑷各级酒精快速脱水，苯或二甲苯透明，石蜡包埋。
⑸切片8~10微米，粘片、烤片。
⑹切片脱蜡，封固。
Foot镀银染色法
⑴取新淋巴结、肝及脾等固定于10%甲醛液或Zenker液12~24小时，常规脱水，石蜡包埋切片。或甲醛固定后冰冻切片。
⑵石蜡切片用二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水。冰冻切片直接用水洗。
⑶1%高锰酸钾水溶液1~2分钟，水洗。
⑷5%草酸水溶液漂白1~2分钟，水洗。
⑸蒸馏水洗1分钟。
⑹2%铁明矾水溶液5~10分钟，蒸馏水洗两次。
⑺入氨银液37℃20~60分钟（室温下延长时间），蒸馏水速洗。
氨银液：10%硝酸银液20毫升加40%氢氧化钠水溶液20滴，产生灰褐色沉淀。不断摇动至沉淀全部沉底，倾去上清液，用蒸馏水洗沉淀3~4次，倒掉最后一次蒸馏水，逐滴加浓氨水，边加边摇使沉淀溶解，再加蒸馏水80毫升，过滤。低温保存可用几天。
⑻5%甲醛水溶液还原3~5分钟，切片呈黑褐色。
⑼流水洗去还原液。
⑽0.1%氯化金水溶液调色30~60秒，蒸馏水洗。
⑾5%硫代硫酸钠水溶液2~3分钟，蒸馏水洗1分钟。
⑿可用明矾苏木精染细胞核，或Van Gieson液复染胶原纤维和肌纤维。
⒀95%酒精和无水酒精脱水2~3分钟。
⒁二甲苯透明，中性树胶封片。
结果：网状纤维黑色，胶原纤维棕褐色，核黑褐色至黑色，肌纤维黄色。
用Zenker液固定的组织效果最佳。
Gomori镀银染色法
方法：
⑴新鲜组织用10%甲醛液、Zenker或Susa液固定，常规脱水，石蜡包埋切片。或冰冻切片。
⑵石蜡切片经二甲苯脱蜡，各级酒精下行至蒸馏水。
⑶0.5~1%高锰酸钾水溶液2分钟，流水洗。
⑷3%草酸或亚硫酸钾水溶液2分钟，流水洗。
⑸2%铁明矾水溶液3分钟，蒸馏水洗2~3次约2分钟。
⑹氨银液1~5分钟（冬天37℃温箱），蒸馏水速洗两次。
氨银液：10%硝酸银水溶液20毫升，加10%氢氧化钾水溶液4毫升，产生灰黑色沉淀。充分摇动至沉淀沉底，倾去上清液，将沉淀用蒸馏水洗3~4次，边加边摇滴加浓氨水至沉淀全部溶解，再滴加10%硝酸银水溶液数滴，使溶液稍混浊，又加氨水使溶液清亮，最后加蒸馏水至100毫升，保存于棕色瓶。
⑺5%甲醛水溶液5分钟，流水洗。
⑻0.2%氯化金水溶液3分钟，蒸馏水洗。
⑼3%草酸或亚硫酸钾（Potassium sulfite）水溶液1分钟，蒸馏水洗。
⑽2%硫代硫酸钠水溶液1分钟，蒸馏水洗。
⑾95%酒精和无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
结果：网状纤维黑色，细胞核灰黑色，胶原纤维深黄色。
网状纤维镀银块染法
方法：
⑴新鲜组织淋巴结、肝、脾（大小 不超过2毫米）用10%甲醛液固定，流水冲洗8~12小时，蒸馏水洗30~60分钟。
⑵浸吡啶（Pyridin）24~48小时至组织呈透明状，流水洗1~2小时。
⑶蒸馏水洗4~12小时至无吡啶味。
⑷2%硝酸银水溶液37℃2~3天，瓶外包黑纸避光，蒸馏水洗。（浸银时间与组织大小、厚薄有关）
⑸入还原液37℃温箱24小时，蒸馏水速洗一次。（还原液应换一次）
还原液：甲醛10毫升，焦性没食子酸1~1.5克，蒸馏水40毫升
⑹常规脱水，石蜡包埋，切片厚6~8㎛。）低浓度酒精快速脱水）
⑺二甲苯脱蜡两次，中性树胶封片。（脱蜡后镜检网状纤维色泽不够，可用0.2%氯化金水溶液增色，5%硫代硫酸钠固定）
结果：网状纤维黑褐色至黑色。
Golgi镀银法
神经细胞胞体及树突（可见突上的棘及小芽结构）轴突呈黑色，背景淡黄色或无色；神经胶质细胞（星形胶质细胞）、毛细血管周细胞及硬骨哈佛氏系统的骨小管、腺细胞的胞内分泌小管及肝毛细胆管（胆小管）均可显示。
方法：
⑴从已固定的整脑切取小块或取新鲜脑组织厚1厘米，浸于10%甲醛液24小时，水略洗。
也可用下列固定液固定：
3.5%重铬酸钾水溶液75毫升，浓甲醛液25毫升
⑵转入 3.5%重铬酸钾水溶液3天左右。可于第二天起，每天取一块组织按下列处理，每日换新液一次。
神经胶质细胞2~3天；大脑皮质3~4天；小脑皮质，4~5天；脊髓灰质4~5天；轴索及无髓神经纤维5~7天
⑶将组织块以少量0.75~1%硝酸银水溶液洗几次至不再出现红褐色银沉淀。
⑷入大量0.75~1%硝酸银水溶液暗箱2~6天（每100毫升加甲酸数滴），隔日换液一次。
⑸水速洗一次。用锋利刀片切一小薄片组织，滴少量甘油镜检。若不满意，可重新上法。
⑹组织块经95%酒精、无水酒精各2小时；等量乙醚酒精1小时；5%火棉胶1~2小时；10%火棉胶1~2小时，按火棉胶硬化和切片处理。
⑺切片厚20~100微米。
⑻经95%酒精速用滤纸沾净，入下列溶液透明：
石炭酸白色结晶10克，甲苯或二甲苯80毫升，木馏油10毫升
⑼捞于载玻片上，滤纸沾净，以甲苯或二甲苯洗数次，用树胶甲苯 液或加拿大树胶或山达胶封⑼片。
山达胶(Gum sandarac)75克，樟脑(Camphor)15克，松节油(Turpentine oil)30毫升，熏衣草油（Lavander oil）22.5毫升
嗜银细胞硝酸银块染法
⑴取胃、十二指肠、阑尾等组织固定于10%甲醛液或Bouin液24小时：
⑵甲醛固定的组织流水冲洗12小时，蒸馏水洗
Bouin液固定的组织，入70%酒精加氨水数商洗涤，除增黄色，蒸馏水洗多次
⑶组织块入95%酒精100毫升加氨水5~10滴浸12小时，蒸馏水洗，吸干。
⑷入1.5%硝酸银水溶液3~5天。
⑸还原24小时。
还原液：对苯二酚1克，甲醛10毫升，蒸馏水100毫升
⑹50%酒精3小时，95%酒精12小时，无水酒精脱水6小时。
⑺二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚6~8微米。
⑻切片脱蜡。透明，树胶封片。
结果：嗜银细胞黑色，背景淡黄色。
Kopsch改良Golgi法
新鲜肝组织不超过3毫米，固定24小时。
Regau液：3.5%重铬酸钾水溶液80毫升，中性甲醛20毫升
入3.5%重铬酸钾水溶液铬化2天，蒸馏水速洗。
或直接入1%硝酸银水溶液快洗2次至无浑浊，再换新液染24~48小时（20~25℃），蒸馏水速洗。
入40%、80%、95%及无水酒精脱水各1~2小时，最后用Golgi火棉胶快速包埋组织块。
切片厚20~30微米。
入80%酒精稍洗。
经各级酒精脱水透明，树胶封片。
结果：胆小管呈棕黑色，背景淡黄色或无色。
对兔肝胆小管效果较理想，要求组织新鲜，百度3毫米；浸银温度不宜过高；浸银后脱水时间尽量短，避免脱色。
Jeker硝酸银注射显示肺泡上皮
⑴将注射器从大白鼠气管插入肺，缓慢而均匀注入0.5%硝酸银水溶液，使肺叶完全扩张，不要过于膨胀。注射后结扎气管，全肺浸入0.5%硝酸银水溶液5~6小时，蒸馏水洗。
⑵将肺剪成小块，蒸馏水洗。
⑶0.5%硝酸银水溶液浸染12小时（室温暗处避），蒸馏水洗。
⑷还原30~720分钟，蒸馏水洗。
对苯二酚0.2克，甲醛0.5毫升，蒸馏水100毫升
⑸各级酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚6~8微米。
⑹切片脱蜡，透明，树胶封片。
结果：肺泡上皮呈棕褐色。
Rio-Hortega染色法
⑴人或动物松果体用10%甲醛固定24~48小时或以上，水洗，冰冻切片12微米，收集切片于蒸馏水。
⑵吡啶硝酸银液50℃温箱30分钟，室温（25℃）2小时，切片呈棕色。
2%硝酸银水溶液10毫升，纯吡啶5滴
⑶吡啶水浸洗。
蒸馏水10毫升，吡啶2~3滴
⑷直接入Penfield碳酸银50℃1小时至切片呈棕黄色，蒸馏水洗。
碳酸银液：10%硝酸银水溶液5毫升加5%碳酸钠水溶液20毫升，滴加氨水至淡黄色沉淀恰好溶解（约18滴），加蒸馏水15毫升。用时取10毫升加吡啶2~3滴。
⑸10%甲醛液还原。
⑹0.1%氯化金水溶液调色至切片呈棕褐色。
⑺2.5%硫代硫酸钠水溶液固定2~3分钟，水洗多次。
⑻切片铺于涂有蛋白甘油的载玻片上，置37℃温箱烤干，二甲苯透明，树胶封片。
结果：神经胶质细胞深棕色 至黑色。
（九）过碘酸Schiff反应（PAS）
显示糖原和多糖
纤维素、淀粉见于植物内，壳质见于植物及无脊椎动物
糖原正常见于细胞浆内，肝脏、心肌、骨骼肌内最大，其次为毛囊、子宫腺、阴道上皮、脐带、中性粒细胞
固定剂多用Carnoy液，80%发上的酒精，Rossman液，4℃保存；AAF液或Gendre液。固定1~2天
Rossman液：苦味酸无水酒精饱和液90毫升，中性甲醛10毫升。固定后在95%酒精洗数日；无水酒精脱水，二甲苯透明、石蜡包埋，切片
切片厚度6~8微米
（阳性组织切片作阳性或阴性参照）
待测切片1张和阳性切片2张脱蜡经酒精下行至蒸馏水
取阳性切片在胰淀粉酶液（淀粉酶1克溶于蒸馏水100毫升）37C1小时，水洗；另一张阳性切片同时作糖原染色
1%过碘酸（高碘酸）或高锰酸钾或四乙酸铅或溴酸液2~5分钟，蒸馏水洗几次
Schiff试剂8~10分钟，流水冲洗5~10分钟
苏木精染核，水洗
脱水，透明，封片
结果：糖原及其它PAS阳性物质呈品红色，淀粉酶消化的切片为无色，细胞核蓝色。
Schiff试剂：
蒸馏水200毫升煮沸，停火，加碱性品红1克，搅拌溶解；冷至50℃，加1N盐酸20毫升；冷至室温（25℃）。加偏重亚硫酸钠或偏重亚硫酸钾1克摇荡，暗处过夜
加活性碳2克充分振荡数分钟，过滤。滤液为无色或淡黄色，棕色瓶保存于4℃冰箱
浓盐酸浓度为12N，1N盐酸=85毫升盐酸/915毫升蒸馏水，或100毫升盐酸/蒸馏水1100毫升
（十）油红O染色法
冰冻切片15微米或更薄，捞在载玻片上，60%异丙醇淋洗
油红O液染色15分钟。（油红O1克，异丙醇60%水溶液100毫升）
60%异丙醇分色至背景无色
苏木精染核，盐酸酒精分色，充分水洗
酒精脱水，二甲苯透明，封片（甘油或甘油明胶）
结果：中性脂肪红色，核蓝色
（十一）Masson三色染色法
选择固定液很重要
1 固定液：甲醛升汞液
流水冲洗，入70%酒精，加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色，5%硫代硫酸钠不溶液去碘，水洗
70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水
二甲苯透明
浸蜡两次
石蜡包埋
切片8微米以下，贴片，烘干
切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红1克，盐酸1毫升
Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟，充分水洗
必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
丽春红品红液染色5~10分钟
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红0.8克，酸性品红0.4克，冰醋酸1毫升
用滤纸沾干
0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
1%醋酸水溶液洗30秒
2%亮绿液染色3~5分钟
蒸馏水98毫升，亮绿Y2克，冰醋酸2毫升
1%醋酸水溶液洗涤
95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
2 固定液：Zenker液
流水冲洗，入70%酒精，加碘液脱汞至酒精呈极浅的棕色，5%硫代硫酸钠不溶液去碘，水洗
70%、80%、90%、95%、无水酒精脱水
二甲苯透明
浸蜡两次
石蜡包埋
切片8微米以下，贴片，烘干
切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红1克，盐酸1毫升
Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟，充分水洗
必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
丽春红品红液染色5~10分钟
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红0.8克，酸性品红0.4克，冰醋酸1毫升
用滤纸沾干
0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
1%醋酸水溶液洗30秒
2%亮绿液染色3~5分钟
蒸馏水98毫升，亮绿Y2克，冰醋酸2毫升
1%醋酸水溶液洗涤
95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
3 固定液：Bouin液
入70~80%酒精浸泡至基本无黄色（可加少量碳酸锂帮助脱去黄色）
90%酒精 、95%酒精、无水酒精脱水
二甲苯透明
浸蜡，包埋，切片小于8微米，粘片，烘干
切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红1克，盐酸1毫升
Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟，充分水洗
必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
丽春红品红液染色5~10分钟
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红0.8克，酸性品红0.4克，冰醋酸1毫升
用滤纸沾干
0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
1%醋酸水溶液洗30秒
2%亮绿液染色3~5分钟
蒸馏水98毫升，亮绿Y2克，冰醋酸2毫升
1%醋酸水溶液洗涤
95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
4 固定液：甲醛（水或生理盐水或磷酸盐缓冲液）、多聚甲醛
染色前在3%升汞液或苦味酸酒精溶液1小时（媒染）
常规脱水，石蜡包埋，切片不超过8微米
切片经二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水
1%地衣红液染弹性纤维30~60分钟，蒸馏水洗去多余染料
地衣红液：80%酒精100毫升，地衣红1克，盐酸1毫升
Weigert苏木精或明矾苏木精染细胞核10~15分钟，充分水洗
必要时用盐酸酒精分色，自来水洗至切片呈蓝色
丽春红品红液染色5~10分钟
丽春红品红液：蒸馏水100毫升，依次溶解：丽春红0.8克，酸性品红0.4克，冰醋酸1毫升
用滤纸沾干
0.5%醋酸水溶液洗30~60秒，蒸馏水略洗
1%磷钼酸水溶液分色3~5分钟至胶原纤维呈淡红色或无色、肌纤维红色
1%醋酸水溶液洗30秒
2%亮绿液染色3~5分钟
蒸馏水98毫升，亮绿Y2克，冰醋酸2毫升
1%醋酸水溶液洗涤
95%酒精和无水酒精脱水各1分钟
二甲苯透明，中性树胶封片
结果：胶原纤维绿色；弹性纤维棕色或深棕色；肌纤维红色；纤维素红色；红细胞红色；细胞核蓝黑色
可用地衣红染弹性纤维。分色时镜检。醋酸分色不要过度。亮绿可用苯胺蓝代替
（十二）六胺银法（略）
肾小囊、肾毛细血管基底膜等。