小鼠肿瘤模型详细介绍

肿瘤模型我们一般常用的就是小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型,另外还有腹水(或者尾静脉注射)以及原位模型,其他的模型很少用,就不提他们了。

小鼠模型分三大类:第一类是以S180、EAC、H22等为代表的,他们的宿主小鼠多选用KM,可产生腹水,也可在皮下成瘤。多以腹水传代,实验时抽取腹水,经过一定稀释后皮下接种构建模型,接踵后第二天开始给药,给药7到10天,接种10天后结束试验,剥取肿瘤称瘤重。

1. 关于构建瘤种

可以用体外细胞株培养后,用PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/mouse,i.p接种即可,最好用6号左右的针头,就是常用的2ml一次性注射的针头。

2. 关于腹水传代

观察到第一代的种鼠肚子较大后(一般约8~9天左右),可以传代,传代时取1ml注射器,用2ml注射器的针头,种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可,注意不要把针头插得很深,尽量浅一点,还可以把老鼠拎起来,利用重力,让腹水集中在某处便于抽取,一般抽个0.5ml就可以了,不用离心。

直接用PBS3~6倍稀释后,接种到新的老鼠腹腔,腹水颜色为白色或者略有发黄都是正常的,但是血性腹水说明不好,需要注意调整,第二代以后,尽量6~7天的时候传代,不要等的时间太久,否则腹水容易血性。三代后可用于试验。

3. 关于接种进行试验

这个时候抽取的腹水需要量比较多,一般需要处死种鼠后,小心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤,注意不要弄破肌肉,然后,用镊子(最好是哪种前面有倒勾的镊子,学名好像是唇型镊)拎起腹部的肌肉,用剪刀剪开一个小口,然后用玻璃滴管或者去掉针头的注射器吸取腹水。

然后进过一定的稀释后,接种到小鼠的腋下。关于稀释量,各个实验室的情况都不一样,最好摸索一下,开始的时候可以适当的计数,但是要用台盼兰染色后计活细胞数。接种部位在小鼠腋下,但是不要深入到腋窝里面,会给以后的操作带来麻烦。接种时的进针处离接种处远一点,让针头在皮下多走一段,不容易污染。

有的人接种的时候喜欢针头向上用力,紧贴着表皮往里走,然后注射的时候感觉阻力较大,打出来的皮丘又紧又圆,这样的接种,会使肿瘤与皮肤严重粘连,不利于最后肿瘤的剥取。也不要紧靠肌肉,肿瘤会与肌肉严重粘连。应该在两者之间,进针的感觉轻松自如,针头很自由,虽然打出来的肿瘤不会很圆很漂亮,但是相对好剥取一些。

4. 关于观测指标

主要是按时称体重,试验结束后剥取肿瘤称瘤重。因为出瘤已经是接种后的第6天左右了,第10天就结束时间,瘤体积的数据意义就不大。小鼠肿瘤很难剥,这是没有办法的,只能耐心,没有太好的办法,剥多了以后,手上会掌握一些巧力,有一些帮助,但是我们还是很头痛小鼠肿瘤试验结束。肿瘤组织周围经常会有一些血窦的形成,弄破后会有血和黄色的液体流出,正常的,但是剥瘤子的时候不要把它弄破,会严重影响瘤重。按照SFDA的规定,平均瘤重小于1g,或者单个瘤重小于200mg,认为肿瘤生长不良,试验作废。

小鼠模型第二类是以lewis肺癌、B16为代表的,他们的宿主多为C57。不产生腹水,只能皮下生长。多用插块法或者匀浆法传代和接种做试验。有一种做法也是接种后第二天开始给药,还有一种做法是接种三天后给药,接种后两周结束试验,剥取肿瘤称重。

1. 关于瘤种构建

体外细胞株,培养后PBS悬浮至1~3×106/0.1ml/site,接种至小鼠腋下,即可。

2. 关于传代与接种

剥取肿瘤,在PBS中取出肿瘤表面包膜和中心的坏死部分,剪刀剪成小块,小块大小以套管针的针口为标准。用镊子将小块从针头处塞进18~20号的套管针,接种至小鼠腋下,用套管针中间的实体针将瘤块推出即可。

还可以在上述肿瘤组织剪成小块后,用玻璃匀浆器匀浆后,200目筛网过滤,收集滤液,活细胞计数,PBS稀释后用注射器接种,稀释量也需要各个实验室自己摸索。

也是三代后可用于试验。

3. 关于观测指标

可以在出瘤后测量瘤体积,但是主要还是考察瘤重。

小鼠模型第三类是以P388、L1210为代表的白血病模型。宿主为DBA2,也有人用C57与DBA2的F1代传代,DBA2用于试验,但是我们两种宿主都传过代,没有发现有什么区别。他们能形成腹水,一般不用于皮下接种试验,平时多用腹水传代,实验时多用腹腔接种或尾静脉接种考察生存时间。也是接种后第二天开始给药。

(0)

相关推荐

  • 研究团队发明可以口服的注射针 无创无痛实现更好疗效

    当你生病的时候,如果有吃药和打针两种治疗方式供选择,你更倾向于选择哪一种?目前,口服用药已经因为技术的革新而不断迭代,以期能够通过加大载药量.优化药物代谢动力,来让患者摆脱注射用药的痛苦.但是在患有糖 ...

  • 都是肉肉,疫苗为何打在胳膊而不是屁股上

    #疫苗为何打在胳膊而不是屁股上# "疫苗为何打在胳膊而不是屁股上",一个看似"理所当然"的简单问题,却是很多科学家经过大量研究做出的最佳选择. 大多数疫苗须注射 ...

  • 山豆根颗粒及其饮片抗肿瘤作用及其机制

    目的:观察山豆根颗粒及其饮片对肝癌H22腹水瘤.S180实体瘤的抑制作用,探讨其作用机制.方法:采用小鼠移植性肝癌H22腹水瘤.S180实体瘤的体内实验方法,以环磷酰胺(CTX)为阳性对照,分别取种瘤 ...

  • ​无需针头通过皮肤直接给药,国内外企业如何用无针注射撬动慢性病市场?

    9 月 22 日,澳大利亚悉尼大学的专家们表示,他们已开发出一种基于 DNA 的新冠病毒疫苗.这款疫苗的特别之处在于,接种时无需针头注射,只需空气喷射通过皮肤直接给药,可有效减轻接种者的痛苦. 无针注 ...

  • 胃癌晚期出现腹水如何诊断?

    大部分晚期癌症患者都会出现肿瘤性腹水的现象,而且出现的几率很大,其中胃肠道肿瘤.肝癌等更易出现这一现象,当然,胃癌晚期出现腹水也很常见. 腹水的诊断程序一般包括以下几方面 ①确定腹水的存在: 腹水定量 ...

  • 1型糖尿病的动物(大小鼠)模型详细介绍

    糖尿病定义 糖尿病(Diabetes)是一种以高血糖(血糖浓度升高)为特征的慢性代谢性疾病,产生原因: ①胰脏胰岛素分泌不足(绝对缺乏胰岛素): ②无法有效利用产生的胰岛素(相对缺乏胰岛素或者胰岛素抵 ...

  • 肝损伤动物(大小鼠)模型详细介绍

    这真是一个可怕的事实:同为黄种人,生长在中国的肝病发病率却是生活在欧美的3倍!中国无疑成为了"肝病大国",约12个人就有1人患肝病.面对如此严峻的现状,对肝相关疾病机制研究和药物开 ...

  • 人源化的小鼠PDX模型详细介绍

    癌症如何发生和发展,取决于它与宿主免疫系统的相互作用.为了让GEM拥有人的免疫系统,科学家将人造血干细胞(多种血细胞的前体细胞)植入免疫缺陷的小鼠体内.这一过程重现了人体免疫系统的某些方面,例如负责攻 ...

  • 肥胖小鼠模型是什么?肥胖小鼠模型详细介绍

    肥胖往往先于糖尿病几年.十几年或二十几年,重度肥胖者发生糖尿病几率比正常体重者增加10倍,75%的Ⅱ型糖尿病诱因为肥胖,但不意味着所有肥胖者都会发展为糖尿病. B6.129S7-Ldlrtm1Her ...

  • 人源化小鼠模型是什么?人源化小鼠模型详细介绍

    肿瘤免疫治疗是继手术.放疗.化疗与分子靶向治疗后,又一种新的能够改善肿瘤患者生存期的治疗方法. 在肿瘤免疫治疗的新时代,人源化小鼠模型评估新疗法.研究组合疗法以及指导个性化免疫治疗的有效工具.人源化小 ...

  • 分子嵌合小鼠肿瘤模型介绍

    小鼠模型虽然可以为人类肿瘤的研究提供有用工具,但有时并不理想,因为毕竟人和小鼠在遗传.生理 / 病理方面存在着巨大差异.对于 IO 研究,肿瘤和免疫系统都可能存在种属差异,生物标志物.抗肿瘤药物靶点. ...

  • 基因工程小鼠肿瘤模型介绍

    自发或诱导肿瘤模型都带有相当的随机性.不确定性,产生的肿瘤类型.特征也经常不能满足研究的需要.随着基因工程技术的发展成熟,对小鼠进行遗传修饰-包括转入新基因.删除基因.基因替换等成为可能. 研究发现, ...

  • MC3R、MC4R大小鼠模型详细介绍

    基因功能 黑皮质素受体3(Melanocortin-3 receptor, MC3R)和黑皮质素受体4(Melanocortin-4 receptor, MC4R)属于视紫红质样G蛋白偶联受体家族. ...

  • 2型糖尿病动物(大小鼠)模型详细介绍

    糖尿病主要分为1型和2型糖尿病,其中2型糖尿病约占90%,已经成为继癌症.心血管疾病之后的第三大严重威胁人类健康的重大疾病,因此对其研究也越发重要,理想的动物模型是研究疾病病理和治疗疾病的关键. 2型 ...