逆转录病毒（Retrovirus）构建技术原理

逆转录病毒（Retrovirus），又称反转录病毒，是一种RNA病毒，其两端为长末端重复序列（LTR）。该病毒呈球形，有包膜，表面有刺突，颗粒直径为100nm左右。逆转录病毒基因组有三个基因：Gag-编码病毒的核心蛋白；Pol-编码逆转录酶；Env-编码病毒的被膜糖蛋白。

逆转录病毒基因组

悬浮框：包装纯化及滴度检测--侵染细胞过程--病毒特点--应用案例

逆转录病毒包装纯化及滴度检测
      逆转录病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装，收集细胞培养上清，通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。

逆转录病毒包装纯化流程

滴度检测方法：定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数。
　　滴度检测原理：逆转录病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组。

逆转录病毒侵染细胞过程
       逆转录病毒基因表达时，需在逆转录酶的作用下首先将RNA逆转录成DNA，形成DNA整合前复合体，随后进入细胞核随机整合到宿主细胞DNA上，经过转录、翻译，完成基因的表达。

逆转录病毒作用机制

逆转录病毒特点
   
     逆转录病毒的最大特点在于其特异性感染分裂期细胞，这是因为只有当被感染细胞处于细胞分裂期间，逆转录病毒DNA基因组才能接触到宿主细胞的遗传物质。
     基于上述特性，逆转录病毒适用于干细胞相关的大量研究，如神经干细胞研究、造血干细胞研究。体内应用时，逆转录病毒适用于研究成年新生神经元或胶质前体细胞的工作。