MTT试剂的用途、原理和配制方法

MTT试剂主要有两个用途：

1．**（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培育的细胞毒性的测定；

2．细胞增殖及细胞活性测定。

MTT试剂原理：

检查原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT试剂还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测**毒性，则表示**毒性越小）。

配制方法——悬浮细胞

1、收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培育基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培育液稀释 （储存液100mg/ml，需预试寻找佳稀释度，1:10-1:20）；③需检查物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul参入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照（加100ml 1640）。

2、置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

3、每孔参入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培育4 h。（悬浮细胞推荐使用WST-1，培育4 h后可跳过步骤4，直接酶联**检查仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）

4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔参入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶联**检查仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值。