礼亲王会盟MiNA，借兵RNAa剿顽疾
新闻没啥，见最后
INDIANAPOLIS and LONDON, May 11, 2021 /PRNewswire/ -- Eli Lilly and Company (NYSE: LLY) and MiNA Therapeutics Limited, a pioneer in RNA activation therapeutics, today announced a global research collaboration to develop novel drug candidates using MiNA's proprietary small activating RNA (saRNA) technology platform.
从RNAi到RNAa
最熟悉的应该是RNAi，以哺乳动物为例，根据guide RNA的来源，分内源性的miRNA及外源性如病毒来源的的dsRNA介导的RNAi，前者起源于核内的转录，先形成pri-miRNA，经Drosha复合物处理后形成hairpin结构的pre-miRNA，经Exportin-5运送出核，再被Dicer切割成22bp左右的双链miRNA，随后被load到RISC的核心蛋白Ago-2，这时passenger链被移除，余下的guide链引导RISC靶向与之互补的target mRNA，一般是在3' UTR，其中siRNA与靶mRNA序列完全互补，会触发Ago-2的RNaseH活性切割，而miRNA不完全互补，很少会介导直接切割，而是引起翻译阻遏，通过TNRC6来招募P body的组分，最终降解mRNA
简单流程如上，但是细节过程也是很复杂，就像虽然是Drosha、Dicer的RNase III催化切割，但是活性分别需要DGCR8或TRBP等Partner，此外像miRNA或siRNA从Dicer-TRBP装载到RISC需要Dicer-TRBP-Ago2形成的RLC，passenger链的移除需要C3PO的内切酶活性，当然这个还是在哺乳动物中，果蝇、真菌甚至植物，关键组分、细节上还是有差异
然后在2006年，UCSF的Long-cheng Li等发现了small dsRNA可以诱导转录激活，当时发现设计dsRNA靶向几个不同基因的启动子区域可以诱导mRNA并表达对应蛋白（fig 1-3），与RNAi类似的是这种激活依赖dsRNA的5/ seeding region的配对，同时也依赖Ago2的活性（fig 4-5），不同的是可以观察到转录沉默相关的一个标志物H3K9甲基化的缺失（与转录激活相关的H3K4甲基化没有显著改变，图略）。
和siRNA类似，saRNA也是成一个22nt左右的双链RNA，同时3'端2nt的overhang，但是机理上就完全两面，目前认知下：
在细胞质中内源或外源来源的双链saRNA被加载到Ago2上
其中passenger链被切割并丢弃，这时形成活化的saRNA–AGO2 复合物，随后在Importin-8的帮助下进入细胞核
活化的saRNA–AGO2复合物结合到启动子区域，招募RNA解旋酶A/RHA和聚合酶相关因子1(PAF1)复合物中的CTR9及PAF1亚基至启动子区域形成RNA诱导的转录活化复合物（RITA），进一步募转录机器和转录激活相关的组蛋白修饰酶，最终引起RNAPol II介导的转录激活
除了结合到启动子区域快
升高了saRNA 靶向的mRNA和最终翻译的蛋白质的水平，除了结合到启动子区域以外，与Noncoding Transcript that Overlaps the Promoter互不结合的saRNA也能激活相应的转录表达
至少在MOA上，是越来越模糊，胞内胞外，抑制激活
saRNA作为一个新的modality，肯定有一些MOA上的优势，要解决主要还是提高稳定性、降低免疫原性及脱靶，还有就是肝脏以外的递送
【来源：Ractigen】
MiNA
成立于08年，14年的时候MiNA Therapeutics, the pioneer in RNA activation therapeutics, announced today that it has completed an exclusive license agreement with The Regents of the University of California relating to intellectual property rights developed by the Li lab at UC San Francisco (UCSF). 有意思的是Ractigen的创始人也就是上文提及的RNA激活现象最早的发现人
管线上进展最快的一直是MTL-CEBPA，16年进入临床，用于肝癌治疗 (NCT02716012)
靶点C/EBP-α是一类具有“亮氨酸拉链”结构的DNA结合蛋白,作为真核细胞转录调控因子,参与肝细胞、脂肪细胞等的转录调控，决定了这类细胞的分化，在多种肝脏疾病中功能异常，上调表达可以改善纤维化和HCC的肝脏功能
MTL-CEBPA由SMARTICLES®脂质体纳米颗粒包裹的双链RNA组成,设计用于激活C/EBP-α基因
可以逆转CCl4诱导的肝损，包括恢复纤维化的组织学特征、降低肝损伤的标志物、恢复正常肝功能，减少高血氨，改善了腹水，最终改善了OS
在HCC的临床前模型中单独使用的确可以特异性上调CEBPA mRNA，改善肝功能并降低肝脏肿瘤负荷
单药临床
设计：第一部分3+3，分QW递增和BIW两种
基线：一共入组了28例患者，截止至当时还有36%在组，患者中HCC 23人大部分伴随肝硬化(20/23)，整体PS 1为主，HCC患者中大部分Child-Pugh评分A5，先前治疗线数中位值1，分别57%、32%和11%的患者接受过TKI、ICB和FGFRi
安全性：MTL-CEBPA 整体上耐受性不错，25%和18%的患者只经历最高Gr1和2的AE，25%的患者经历的≥Gr3 AE可能与治疗相关，包括胆红素和谷氨酰转移酶升高、低磷酸盐血症、贫血、高血压，另外3例(11%)因为药物毒性终止治疗，包括胆红素升高、急性冠状综合征和GGT升高各1例
PK：二室模型拟合下快速分布相和缓慢消除相，Cmax和AUC呈现剂量比例递增、半衰期36h，而且2剂之间暴露连续但没有蓄积
PD：白细胞中观察到CEBPA mRNA的表达显著升高，也观察到QW给药后WBC显著且反复的升高，确认了依赖C/EBP-a的粒细胞生成
病例：一位78岁女性，乙肝伴随肝硬化，先前TACE、射频消融、手术切除、索拉和FGFR4单抗治疗，经MTL-CEBPA治疗后Wk8获得PR病灶缩小42%并在Wk16确认，另外也观察到AFP显著快速下降，治疗20个疗程也就是1.6以后依旧维持缓解病灶缩小73%
后续HCC 单药做了更新：
剂量：QW和前次披露无大的差别，70mg/m2 BIW给药增加到了11例，同时增加了70mg/m2 TIW的给药频次
患者基线及缓解：一共入组了39例患者全部是HCC，接近一半完成了2个疗程，35例患者可评估疗效，其中ORR 2.9%(1/35)，SD 42%(15/35)，也就是前面提及那例28mg/m2QW 的HCC伴随肝硬化的78岁患者获得了确认的PR，并且持续了24mo，AFP也显著下降，悲剧的不是只有1例PR，而是只有最低的剂量水平才有PR
安全性：MTD未达到，大部分TEAE都是Gr 1-2，24例患者(61.5%)报道了≥Gr3 TEAE，肝功能的影响都是一过性，14例患者中报道16例SAE——但是没有SAE在＞1例患者以上，一共3例患者因为AE终止治疗——这个和前次披露一致，安全性和可耐受性可以接受
后续治疗：有8例HCC患者后续接受了TKI治疗，其中3例先前未经TKI治疗的患者获得CR且无复发生存＞1年，剩余1例PR、2例SD，这TKI naive的入组图啥
PK：QW给药下各个剂量组之间半衰期基本一致，而CL和Vd随剂量升高而降低，另外TIW中单日给药会有少量蓄积，年龄、性别、合并用药情况也都不会影响PK
PD：CEBPA mRNA水平提高了1.5倍，上次提及WBC显著升高，可能是CEBP-α依赖的粒细胞生成机制，另外发现腺苷和PD-1、CXCR4 mRNA这类免疫抑制的标志物水平下降
病例：HCC患者接受2个疗程治疗后发现促肿瘤和免疫抑制型的M2巨噬细胞显著降低，所以MOA可能就变成了上调粒细胞中CEBPA基因，将TME从免疫抑制型重塑为pathogen patrolling，另一例62岁的HCC患者，携带HBV和HCV，先前接受消融、TACE和多柔比星，在MTL-CEBPA的2个疗程后PD 随后接受TKI后1个月获得CR，肝及肺部病灶全部消失
总的来说，单药一般，要靠联合，MOA假说也发生了变化，后续会尝试抗血管TKI及免疫治疗的联合
联合索拉非尼
由于当时的标准疗法索拉非尼单药很难获得长期的缓解或治愈，所以需要联合疗法来提升疗效，这里在大鼠肝癌模型发现：相比单独的索拉非尼，MTL-CEBPA联合索拉非尼有更强的抑瘤效应，AFP也得到显著降低但是并没有增加肝毒性
随后启动了MTL-CEBPA QW联合索拉非尼治疗晚期HCC的开放Ph1b
基线：一共入组36例HCC，其中22例接受双药联合，14例接受MTL-CEBPA后序贯索拉非尼，随后进一步按照是否TKI经治和携带肝炎病毒分组，75%的患者是TKI naive
BOR：4组分别9/6/5/3例患者可评估，共5例缓解，其中CR 2例，PR 3例，CR全部在TKI naive的肝炎病毒携带组，也就是第一组，9例可评估患者中2例CR、2例PR、3例SD，第二组即TKI naive的未携带肝炎病毒组6例接受评估的患者中1例PR，5例SD，接受过TKI的患者不管是否携带肝炎病毒，BOR均为SD，凭良心说，没亮眼的
CR病例：1号患者携带HBV，先后接受多柔比星和手术切除，但未接受过TKI，肝左叶有一12mm直径病灶，接受MTL-CEBPA+索拉非尼后，在第2个疗程的22天确认CR；2号患者HCV发展的肝硬化，之前接受过TACE同样也未接受过TKI，在肝左叶和肝右叶各有1个30mm和18mm的病灶，患者现接受2个疗程MTL-CEBPA确认PD，随后再接受2个疗程索拉非尼获得CR，到了20年5月依旧维持CR状态
安全性：联合方案整体上耐受性非常好，肝功能性能都是一过性，没有AE引起治疗终止，10例患者中报道了15例SAE其中8例治疗中断没有治疗终止
PK：尽管没有单独评估联合方案中索尼对MTL-CEBPA的PK的影响，但是整体和MTL-CEBPA单药十分接近
MOA：治疗后M-MDSC和PMN-MDSC显著降低，M-MDSC相关的 CD274、Arginase 1和NF-kB等免疫抑制标志物也观察到mRNA水平的下降
总结下里，MTL-CEBPA 单药也就那样，联合索尼也没看到太兴奋的结果，机制上进一步探索了调控抑制型TME的MOA
基于MDSC调控
MDSC通常会浸润到肿瘤组织，通过促进肿瘤血管生成和免疫抑制来促进肿瘤生长，研究发现荷瘤小鼠的MDSC中C/EBPα的表达是下调的，后在小鼠中敲除Cebpa(CebpaΔ/Δ)加速了肿瘤生长，这种敲出了Cebpa的小鼠的肿瘤中MDSC浸润和血管生成都有增强，进一步的研究证明C/EBPα在MDSC的扩增中起到一个负调控的作用：CebpaΔ/Δ的MDSC表现出对肿瘤血管生成和肿瘤生长的促进作用：
后面试验中MTL-CEBPA处理肿瘤有抑瘤效应而且依赖于T细胞，同时一定程度上也可以逆转MDSC和TAM对T细胞增殖的抑制，进一步研究细胞功能发现MTL-CEBPA可以抑制TAM的信号通路和调控因子
从MTL-CEBPA对髓细胞调控的影响看，对部分免疫抑制的靶点不管是转录水平还是翻译水平都有下调，而且接受MTL-CEBPA后第一天M-MDSC、PMN-MDSC不管是绝对数量还是在单核细胞中占比都有显著下降
之前接受MTL-CEBPA+索拉非尼治疗的获得CR的2例HCC患者体内观察到，在治疗后促瘤的M2巨噬细胞基本消失
联合免疫治疗
既然是通过下调MDSC来恢复T细胞的抗肿瘤免疫，那么各类IO肯定是要联合的
显示在CT26模型中，MTL-CEBPA单药的抑瘤效应一般，联合anti-PD-1后在抑瘤上显著的增效，抗肿瘤免疫相关的基因表达也显著上调，而且这种表达上调是与疗效存在着相关性，另外TIL的增加同样也和MTL-CEBPA+PD-1的疗效存在相关性——肿瘤抑制的小鼠中不管是相关基因表达和TIL数量的上调都更显著
也观察到射频消融也可以在一部分肿瘤中激活肿瘤免疫应答，这里看到相比其他方，RFA联合MTL-CEBPA+anti-PD-1的抑瘤在强度和缓解深度上都有明显的优势，而且也观察到三联下肿瘤浸润的TIL和NKT的显著增加
上面都是临床前模型，登记了三个临床
其中联合PEMBRO的Ph1b 19年启动
另外 C/EBPα的真正功能、点突变等等的影响，也不是一个上调能解决的，从这个角度看，RNAi比RNAa好做不是没有道理，总之道阻且长，但也只能无问西东
其他靶点：HNF4
肝细胞核因子4-α/HNF4-α是在肝脏富集的转录因子，是肝脏细胞的关键调控因子，调控了＞60%肝功能相关的基因，另外在肝脏、肾脏和肠的发育中扮演着关键角色，其功能的破坏直接影响了糖和脂代谢
这个留个尾巴，看不动了
Under the terms of the agreement, MiNA will utilize its saRNA platform to research up to five targets selected by Lilly that aim to address diseases across Lilly's key therapeutic focus areas. Lilly will be responsible for preclinical and clinical development of candidates and will retain exclusive commercialization rights for any products resulting from the collaboration. MiNA will receive a $25 million upfront payment and is eligible to receive potential development and commercialization milestones up to a total of $245 million per target, as well as tiered royalties from the low-single to low-double digits on product sales resulting from the collaboration.
"Small activating RNAs are a promising new technology, which will expand the breadth of Lilly's RNA therapeutics platform and the targets we can pursue," said Andrew C. Adams, Ph.D., vice president for new therapeutic modalities at Lilly. "We are excited about the potential of combining MiNA's leading saRNA platform and our expertise in new modalities to accelerate development of RNA-based medicines in areas of high unmet medical need."
"This collaboration with Lilly is an important validation of our saRNA platform," said Robert Habib, CEO of MiNA Therapeutics. "Lilly's expertise in the field of RNA therapeutics and clinical development will greatly enhance our efforts to realize the technology's full potential. Together, we aim to unlock new targets in multiple therapeutic areas and to ultimately move them towards clinical development and commercialization."
About MiNA Therapeutics
MiNA Therapeutics is the leader in small activating RNA therapeutics. Harnessing innate mechanisms of gene activation, small activating RNA therapeutics are a revolutionary new class of medicines that can restore normal function to patients' cells. We are advancing a proprietary pipeline of new medicines with an initial focus on cancer and genetic diseases, while collaborating with leading pharmaceutical companies to apply our technology platform across a broad range of therapeutic areas. Based on our unique know-how in RNA activation we are expanding the possibilities of RNA-based medicine for patients.