检验结果出现>TEST，真的就是超出检测范围吗？
电化学发光免疫测定法（ECLIA）是临床上常用的一种检测方法，该方法一般检测重复性较好，结果相对可靠。
在实际的分析工作中，仪器检测结果出现>或<TEST的报警信号，多见于结果太高或太低，一般根据需求选择稀释与否，比较少人去关注此类报警背后的项目原理及电信号强弱。
通常如果当天质控在控，结果照常审核，往往忽视项目之间的逻辑关系以及与临床情况是否相符。作为一名合格的检验工作者，需要结合检测原理、报警信息、患者临床情况，深入探讨分析其结果的可靠性就显得尤为重要。
近日笔者及同事在审核结果时就发现有两个标本雌二醇（E2）>3000 pg/mL，仪器提示>TEST，于是按照要求放进仪器进行稀释检测（厂家推荐的最佳稀释比）。
二十分钟后，仪器自动稀释结果出来了，原倍结果>3000的两个标本，稀释后一个为1702，一个为1267，如图一所示，与原倍结果相差甚远。
这引起了笔者的疑惑，到底稀释前后哪个结果是准确的？又是什么原因导致了两次结果差异如此之大？
图一
为了排除试剂因素的影响，我们首先检查了仪器里使用的试剂，状态正常，目测并无磁珠粘附盖上或底部产生气泡等干扰。更换了一盒全新的试剂进去，重测标本，结果分别为1839和1460，与之前仪器自动稀释后的结果相近。那么是什么导致第一次检测结果会出现>3000？
带着上面的疑问，笔者回顾了下当天其它检测雌二醇的标本发现，当天共有9个标本雌二醇仪器检测结果为>3000，而且集中出现在12：30至14：30之间时间段，之前或之后的结果都是在线性范围内的。
一天里面同时出现多例雌二醇大于检测上限，而且集中分布于同一个时间段，显然不是巧合，出于谨慎考虑，笔者将所有雌二醇大于3000的标本重新进行了检测。
重测之后的标本值都恢复至了线性范围以内，甚至正常水平。同时，我们放了原试剂对比重测，结果与新试剂一致，结果如下表一数据所示。重测质控，新旧试剂均在控，证明试剂本身没问题。
表一 新旧试剂结果比对
那么，是什么原因导致了该时间段内出现多个标本出现异常高值？
在工程师指导下，我们查看了异常结果标本及异常结果前后标本所用的试剂瓶编号，发现异常结果的出现刚好是在机上两瓶相同试剂使用换瓶交替期间，即前一瓶试剂用完，开启第二瓶试剂的时候。
查阅试剂说明书，发现雌二醇检测应用的是竞争法。根据竞争法原理，发光信号值跟待测物的含量呈反比。换句话说，凡是可以使发光值减低的因素，都可以使仪器检测结果大于实际值甚至出现大于检测上限的情况。到此，整个事情的发展似乎有了眉目。
一般情况下，除了个别项目，如FT3、FT4、FPSA等结合蛋白[1]，由于稀释会破坏其平衡，不建议稀释以外，大部分项目都会通过经验证后的稀释方式使其落在检测线性范围内，得到具体的检测数值。
本次案例中遇到的雌二醇，笔者在之前的临床工作中也时常会遇到大于检测上限标本，经过稀释之后结果均大于原倍数值，像这次稀释前后数值差距这么明显的还是首次遇到。
常规的想到的原因是是患者血清中可能存在异嗜性抗体或一些药物等因素的干扰[2]，标本经过稀释降低了干扰物质对检测的干扰，因此会出现稀释结果比原倍的结果偏低的情况。
在本案例中，并非单一标本出现原倍与稀释后结果不一致，而是多个标本同时间段内同时提示大于检测上限，基本可以排除标本本身干扰引起的异常。
通过逐步排查的过程，初步可以判定本次雌二醇出现多个标本大于检测上限的情况是由于检测过程中试剂换瓶，新试剂可能在搅拌过程中出现了气泡，导致仪器在吸试剂时吸到的磁珠量不够，发光值假性减低，进而引起检测数值假性偏高。
试剂换瓶之后，经过大概10个检测之后，瓶中气泡消失，检测又恢复了正常，这也是为什么异常结果只是集中出现在一个时间段内的原因。
这种情况过去偶见于旧试剂使用到最后1-2个测试，发生在新试剂，而且连续影响10个测试还是比较罕见。
考虑该干扰出现在试剂换瓶过程中，气泡的产生存在一定偶然性。经与工程师沟通后，对仪器搅拌棒进行了调试和排查，当场仪器调试并未发现明显问题，只能在后续临床工作中观察竞争法项目检测情况再进行下一步硬件调试排查。
对于检验工作者而言，对化学发光法方法学第一印象都是结果稳定可靠，重复性好[3]。因此，结果审核时，只要首次质控在控，并排除标本异常性状，一般对于仪器结果比较信任。
本案例中，倘若不是出现连续多个异常高值结果，且通过稀释发现稀释前后结果存在巨大差异，很可能会忽视这种异常检验结果。
一旦误报，极可能会耽误患者诊治。因此在临床工作中，对于异常结果，尤其是同一时间段内连续出现的多个异常结果，结果审核时需要结合临床诊断，加强与临床医生的沟通，多问一个为什么。
其次，必须熟知相关检测的方法学，采取“追本溯源”的思考方式，遇到问题时从原理入手分析原因。在日常工作中，质量控制固然要做好，但也可以采取多种质量控制手段，比如基于病人标本移动均值实时检测，及时发现试剂或仪器等问题。
专家点评
该案例来源于日常临床检验工作中，充分体现了作者严谨负责的工作态度。常规印象中，化学发光法检测结果相对稳定、可靠。该案例打破了我们常规的思维，当质控在控，标本正常情况，检测结果同样可能是错误的。作者抽丝剥茧，层层排除，从原理出发，逐步找出引起异常检测结果原因。提醒检验工作者在面对异常检验结果，必须结合临床诊断，熟悉检测项目背后的检测原理，有助于辨别异常检验结果。
中山大学孙逸仙纪念医院 段朝晖
【参考文献】
[1]孙臻懿，潘洁，彭波.游离甲状腺素线性及回收实验的研究[J].分子诊断与治疗杂志,2015,7(05):341-346.
[2]汪怀周，贺铮雯，鲁琼，等.异嗜性抗体干扰引起血清多项肿瘤标志物显著升高1例[J].检验医学,2019,34(11):1054-1056.
[3]张兴宗，施雄飞，邹映东，等.罗氏Cobase602电化学发光分析仪分析性能验证[J].国际检验医学杂志,2019,40(03):368-370.
来源：检验医学