小鼠尾静脉病毒(腺病毒、慢病毒)注射操作流程
1、固定建议自制了一个小圆筒,筒的直径正好容下一直小鼠,筒的一端是盲端,筒身上开了N个通气空,有一个后盖,后盖上留有一圆孔,正好容下尾巴。由于小鼠有钻洞的习性,把它往筒口一放,自己就钻进去了,然后把尾巴从盖孔中穿过,盖上后盖即可。找一张桌子,把尾巴压在桌边沿上,由于边沿是个直角,把尾巴的下1/3处压在直角上能使尾部暴露很好。
2、扩张血管小鼠尾静脉用热水泡一下或是用75%的酒精擦拭小鼠尾静脉,以使注射前使尾静脉充分充血扩张;或是在上方悬挂一灯泡,在适当距离烤尾静脉也可以使尾静脉充血扩张。3、注射小鼠尾静脉共三根,一根背侧,另两根分置于两侧,腹侧是动脉。
每只小鼠病毒注射量:以下为建议,具体的注射量需要实验摸索纯化过腺病毒:1-5×109毒量注射(1),比如纯化腺病毒滴度为1×1011PFU,则每只小鼠注射体积约为10-50ul。浓缩慢病毒:1-5×107毒量注射,如慢病毒滴度为1×10 8PFU/ml,则小鼠理论上注射100-500ul,实际上每次注射体积有严格要求(见下方),所以如果量不够,需要分多次注射,每次注射至少间隔1-2天。每只小鼠病毒注射体积:注射体积不要超过200ul,最好控制在100ul以下,注射剂量过多,也会发生充血性心衰。关于注射针:一般小鼠尾静脉注射可采用1ml注射器,并更换为4号针头。(不要用1ml注射器配套的针头,太大了!)建议选用胰岛素注射针(有大小容量,见下图,有很多厂家,图为BD的胰岛素针),可按需选择。
尾静脉大鼠四号针头300ul小鼠四号针头100ul
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