基于Edman降解法的蛋白N-端测序步骤

Edman法测定单个氨基酸循环包括3步：第一步是在碱性条件下，PITC与蛋白N端的游离氨基结合；第二步是在酸性溶液中，N端残基被切除；第三步是PITC结合的残基转化成为更为稳定的PTH残基，经过在线的HPLC分析，根据洗脱时间来确定氨基酸种类。

测序步骤：蛋白样品一般先进行SDS-PAGE的分离，保证样品的纯度满足测序的要求；随后将SDS-PAGE上的蛋白样品转移到PVDF膜上；经过染色确定把蛋白条带并切出；Edman测序仪对得到的PVDF膜上的蛋白样品进行分析。测序原理如图1所示：

图1 Edman降解法测序原理

Edman测序（N端测序）机器型号：PPSQ-31A

图2 PPSQ-31A 蛋白质N端测序仪器