大/小鼠骨髓间充质干细胞的分离"贴壁筛选法"

贴壁筛选法是利用细胞贴壁时间及贴壁牢固性的不同，逐步将非贴壁细胞和其它杂质细胞去除的一种简单易行的方法，常用于干细胞的培养中，因此用于分离BMSCs最为广泛。

利用BMSCs贴壁生长特性，更换培养液逐步去除漂浮生长的造血系统细胞即可获得较纯化的BMSCs；而且骨髓中的造血干细胞能分泌生长因子和促贴壁物质,可促进BMSCs贴壁生长，贴壁筛选法也常被称为直接培养法或者全骨髓法。

操作步骤

01 以颈椎脱臼法处死SPF级3-4周龄C57BL/6J小鼠或者SD/Wistar大鼠，用75%乙醇浸泡。

02 随后在鼠的腿的位置剪开外皮和内皮，无菌状态下取出双侧股骨和胫骨，浸泡于无菌含双抗PBS溶液中。剔除股骨和胫骨周围的肌肉、结缔组织（图1-1），用含双抗的PBS溶液清洗三遍。

03 用眼科剪剪去股骨和胫骨的两端，暴露骨髓腔（图1-2）。

04 用注射器以完全培养基反复冲洗骨髓腔直至骨头发白（图1-3）。

05 收集骨髓液（图1-4），离心（图1-5），后加入适当培养基（含20%血清）（图1-6）接种于培养基皿（图1-7）中置于37℃，5％ CO2，饱和湿度的细胞培养箱中培养（图1-8）。

06 24-48h后去悬浮，接下来的每3天换液一次，直到需要传代。

对初次培养者来说，贴壁法分离BMSCs操作简单易掌握，不易发生污染，是一个较好的分离方法。不足的是分离提取的细胞纯度相对不高。