HBV转基因小鼠模型介绍及应用

1. 基本信息品系名称：B6-Tg (HBV)5 Vst /Vst常用名：C57BL/6-HBV; HBV 转基因小鼠背景：C57BL/6NCrl毛色：黑色品系建立：将1.28倍长度的HBV(A型，GenBank: AF305422.1) 线性化片段注入C57BL/6NCrl小鼠胚胎原核，获得转基因阳性小鼠。通过外周血HBV拷贝数分析，保留了拷贝数达到108 IU/ml的首建鼠。按照半合子配野生C57BL/6NCrl小鼠的方式建立了HBV转基因小鼠品系。2. 表型分析（1）外周血中人乙肝e抗原，乙肝表面抗原和外周血HBV病毒拷贝数分析表明，雌鼠和雄鼠均有较高水平的表达。性别数量平均值体重（g）HBeAg（COI)HBSAg（COI)HBV-DNA(IU/ml)♀7017.99495.215.80E+045.25E+07♂7022.13846.611.29E+056.77E+07①HBV DNA数据散点图（平均值为5.25E+07）

图1  5~8周龄HBV小鼠外周血中HBV病毒拷贝数分析。②HBeAg（COI) 数据散点图（平均值为495.21）

图2  5~8周龄HBV小鼠外周血中e抗原HBeAg（COI)分析。（2）不同月龄HBV小鼠肝脏、脾脏大体观（Chin Hepatol, 2018, 23(1): 26-30）

图3 不同月龄HBV小鼠肝脏、脾脏大体观。（3）不同月龄HBV小鼠肝体比、脾体比，差异不显著（Chin Hepatol, 2018, 23(1): 26-30）

图4 不同月龄HBV小鼠肝体比、脾体比。（4）采用HBV Tg小鼠和CCL4诱导结合，可以成功建立乙肝肝纤维化小鼠复合模型（参见Acta Lab Anim Sci Sin,2019,27(5)）。

图5  6种小鼠模型肝组织病理HE、天狼猩红染色与胶原半定量分析。A. 肝组织病理HE、天狼猩红染色；B. 胶原染色半定量分析；**P < 0.01 vs WT，▲▲P < 0.01 vs rAAV+CCl4，n = 5。（参见Acta Lab Anim Sci Sin,2019,27(5)）。研究数据表明HBV Tg 小鼠在联合CCl4 染毒12 周后能够稳定成模。合理地选用小鼠慢性乙肝模型可以有效解决HBV 在病毒感染、复制、免疫应答和药物评价方面的难题。3. 应用领域高水平表达HBV病毒的小鼠模型，为研究病毒和宿主因素影响HBV复制、发病基因和生理学过程提供了部分可能性；为控制HBV复制研究，提供了稳定可遗传的小动物模型。该模型可用于研究HBV、治疗药物和疫苗及更下游的慢性肝炎和纤维化（结合化学诱导）。4. 注意事项（1）因为B6背景雄鼠大于6周龄后极容易发生咬架打斗情况，为避免意外发生，建议单只单笼饲养和实验。若实验空间紧张，建议选择雌鼠进行实验。（2）根据卫生部文件《人间传染的病原微生物名录》，HBV属于第三类病毒，需要在ABSL-2(BSL-2)设施进行实验。（3）为了确保安全，建议接种HBV疫苗后，HBV抗体阳性的人员，才能接触该动物进行实验和实验。（4）实验小鼠、排泄物、垫料和相关设施，按照ABSL-2(BSL-2)要求进行处理。5. 参考文献（1）LG Guidotti, B Matzke, HSchaller and F V Chisari. J. Virol. 1995, 69(10):6158.（2）J. Ren, L.Wang, Z. Chen, et al. Journal of Medical Virology 78:551–560 (2006).（3）黄恺， 孙鑫， 赵志敏，等. 两种乙肝肝纤维化小鼠复合模型的比较[J]. 中国实验动物学报,2019,27(5).Huang K,Sun X,Zhao ZM, et al. Comparison of two composite mouse models of hepatitis B fibrosis. Acta Lab Anim Sci Sin,2019,27(5).（4）孙鑫，黄恺，赵志敏，等． C57BL/6N-Tg（1．28HBV）/Vst 乙肝病毒转基因小鼠肝脏炎症与纤维化的病理特点． 肝脏，2018， 23（1）： 26-30． Sun X,Huang K,Zhao ZM, et al. Pathological features of liver inflammation and fibrosis in hepatitis B virus transgenic mice C57BL/6N -Tg(1.28HBV) /Vst [J]. Chin Hepatol, 2018, 23(1): 26-30.