酚法检测蛋白-生物缓冲剂tris和EPPS谁更合适

三羟甲基氨基甲烷Tris的缓冲范围在6-8左右，适合绝大多数生物化学实验，尤其是在蛋白质、核酸的相关研究实验中；羟乙基哌嗪丙磺酸EPPS也是适合蛋白质、核酸研究实验的，价格比Tris更贵，那么哪一个适合Folin酚法检测蛋白实验呢？

Folin—酚试剂法是测定蛋白质浓度常用的基本方法，在生物化学领域得到广泛的应用。在实际应用中通常用EPPS（HEPPS）来作为缓冲剂用于Folin酚法检测蛋白含量，而不是使用Tris缓冲剂。

缓冲剂Tris和EPPS用于蛋白含量检测

Folin酚法测定蛋白含量的显色原理与双缩脲方法是相同的（但EPPS不能用于缩二脲/双缩脲检测），不同点是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。Folin酚法检测蛋白含量的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，当然也有一些不足之处是费时较长，标准曲线不直，专一性较差，干扰物质较多。

凡干扰双缩脲反应的基团，如-CO-NH2，-CH2-NH2，CS-NH2以及Tris缓冲液、蔗糖、硫酸铵、巯基化合物均可干扰Folin—酚反应，而且对后者的影响还要大得多。此外，酚类、柠檬酸对此反应也有干扰作用。

Folin—酚试剂两种试剂组成。试剂一由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。试剂二是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。此法也适用于测定酪氨酸和色氨酸的含量。本法可测定范围是25—250μg蛋白质。

综上所述，Folin酚法测定蛋白含量的优点是灵敏度高，缺点是耗时长是有干扰，而Tris也是会产生干扰的，应该用EPPS缓冲剂。