担心样品检测不准?做好这点是关键!
漫漫科研路总是状况百出,好不容易得到的样本却只有那么一点,只能取用很少的样本量去检测!
这么少的样本量,能达到实验检测要求吗?
普通实验室仪器测定,是否存在很大的误差呢?
万一测定失败,样品量有限就没有再来一次的机会了
。
我们在实验过程中,有没有什么方法可以精准测定微量样品的蛋白、核酸浓度呢?推荐一款 Nano-600 超微量核酸蛋白测定仪,可以让你轻松、精准、稳定和可靠地测定微量样品。长按识别下方二维码即可免费申请试用。
核酸的浓度和纯度的检测原理
DNA 吸收光谱实际上是单个核苷酸吸光度的总和。双环嘌呤如腺嘌呤和鸟嘌呤有着较高的吸光度,因此吸光系数要比单环嘧啶如胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的高。
纯度检查
核酸提取时,可能残留微量的酚、氯仿和蛋白质等杂质,因此必须检查核酸的纯度。核酸纯度可以通过测定 260 nm 和 280 nm 处的吸光度的比值来评估,纯的 DNA 其 A260/A280 比值在 1.8 左右,纯的 RNA 其 A260/A280 比值在 2.0 左右。
波长 |
污染物 |
A260/A280 |
蛋白质在 280 nm 有最大吸收,该比值主要用来检测蛋白质的污染物。下面的比值表征是比较纯的样品: DNA:1.6~1.8 (> 1.9,表明有 RNA 污染;< 1.6,表明有蛋白质、酚等污染) RNA: 1.9~2.0 (< 1.7 时表明有蛋白质或酚污染;> 2.0 时表明可能有异硫氰酸等残存) |
A260/230 |
苯酚、尿素、EDTA、含有肽键或芳族化合物的分子在 230 nm 有吸收。比值在 1.8~2.2 间表明是纯的核苷酸样品。 |
A320–A340 |
有时在脏比色皿上会检测到一些粒子吸收,而实际上该处核苷酸是没有吸收的。因此在 320~340 nm 之间的波长常被用作背景扣除。 |
如何保证核酸检测的准确性
超微量核酸蛋白测定仪最重要的是什么?精确、稳定、可靠。因为超微量检测,差之毫厘谬之千里啊。体积缩小/检测光路缩短,对仪器分辨精确性和稳定性要求当然更高;而利用牵引微量液体形成的液柱构成光路,来代替比色皿,对样本液柱形态进行质控校正数据非常重要。
图文来源:嘉鹏科技