【衡道丨干货】术中冰冻切片快速免疫组化
术中冰冻切片快速免疫组化技术，看完这个标题，你接收到了什么关键词？是不是感觉拆分开的术中冰冻切片和免疫组化都很熟悉，但是这个组合技就不太了解了？今天的推文呢，就给大家唠明白这个组合新词。
首先呢，一定需要单独说说术中冰冻切片和免疫组化！（该部分内容如果班门弄斧了，请自行跳读~）
术中冰冻切片诊断
术中冰冻切片诊断在临床手术中的应用非常普遍，它是在手术进行的过程中，将取下的组织在-20℃低温条件下快速冷冻，并进行切片、染色、阅片，实时签发病理诊断报告。这一套高水平的病理诊断，一般要求病理科医生在30分钟内完成，以便明确肿瘤的良恶性和手术范围，指导手术台上外科医生的下一步手术方案。
但是，术中冰冻切片也具有一定的局限性，特别是遇到部分细胞形态相似的病例（尤其涉及良恶性判断）、肿瘤含量极少的组织、涉及原位还是浸润的癌种，难以从组织学上进行判断，给诊断带来了极大风险。
免疫组化
免疫组化，是对抗原进行定位、定性或定量研究。利用抗原和抗体特异性结合的原理，免疫组化通过标记抗体的着色剂显色（酶、荧光素、同位素、金属离子等），确定组织细胞内的抗原（主要是多肽和蛋白质）。免疫组化的常用标本主要是两大类：组织标本和细胞标本，而制作组织切片的最常用方法是石蜡切片。
在临床病理诊断中，免疫组化发挥了重要作用：
判断肿瘤的良恶性；对恶性肿瘤进行明确的分期；对细胞的属性进行判定，确定肿瘤的来源；对来源不明的转移瘤，进一步明确其原发部位；对未分化恶性肿瘤进行组织学分类；对不同器官与组织交界处肿瘤进行分类；发现微小转移灶；与治疗及预后有关的免疫组化标记物；用于检测及诊断多种感染性疾病病原微生物，具有很强及时性、高敏感性和特异性；药物靶点免疫组化可以确定药物治疗的靶点，进行疗效评价并预测后续的的治疗反应[1]。
传统免疫组化方法采用石蜡切片，检测过程包括脱蜡至水、抗原修复、一抗、二抗孵育、洗脱、显色等步骤，较为复杂，耗时最短亦需要3小时。我们都知道，常规的免疫组化根本无法在手术过程中做到快速诊断。
术中冰冻切片快速免疫组化
了解了术中冰冻切片和免疫组化的优势和局限，再来说明术中冰冻切片快速免疫组化大家就很容易理解了！术中冰冻切片快速免疫组化就是结合了二者的优势，可在短时间内通过对特殊指标的免疫组化染色来明确诊断的一种病理检测技术。
看到这里，对这个有点炸裂式的「化学反应产物」你是不是有不少疑问：
1、 这是啥原理啊？如何能实现快速免疫组化？
2、 检测过程一般需要多久？
3、 诊断准确率怎么样？
接下来这些问题将一一作答！
自免疫组化染色问世以来，在实验操作标准化和规范化的前提下，缩短染色时间以及提高染色质量一直是病理医生追求和探索的目标之一。从在不同期刊发表的研究成果，我们可以窥得一二。
比如：
杨勇等曾指出，冰冻切片固定液的改进及在温箱中孵育时间的控制，使术中冰冻组织的快速免疫组化染色均在 1 h 内完成[2]。
李俸媛等尝试采用标记的葡聚糖聚合物法（labeled dex tran polymer, LDP）对冰冻组织样本进行快速免疫组化染色，使得快速免疫组化染色在切片后 15-17 min 内完成[3]。
贾晓敏等将微波加热引入一种两步法超敏试剂盒的免疫组化过程，使得全流程耗时仅25 min左右[4]，等等。
在更短的时间完成了免疫组化染色过程，这一病理检测技术对染色质量和诊断准确率是否有影响呢？
以上研究中，研究者给予我们的结论是正向的。在2019年一篇题为《术中冰冻切片快速免疫组化HE染色技术诊断硬化性肺细胞瘤和肺腺癌的应用对比》的文章中，最终结论指出：术中冰冻切片快速免疫组化诊断硬化性肺细胞瘤和肺腺癌显著优于术中冰冻切片HE染色[5]。在2018年刘梅等的研究中，术中冰冻切片快速免疫组化提高了乳腺病灶和前哨淋巴结术中诊断准确性，降低了延迟诊断率；而且检测流程耗时约 10 min[6]。
术中冰冻切片快速免疫组化的优点总结一下，一只手不够数啊！概括起来就是：
染色操作简便、制作时间更短；
载玻片不需要进行防脱片处理；
染色的重复性、可比性更好；
对一些难以明确诊断或疑难病例可以协助诊断，提高结果的准确率；
在抗原保存方面，冰冻切片优于石蜡切片；
大部分抗体表达背景干净，结果可靠。[3,7]
让更多患者从术中冰冻切片快速免疫组化中获益，这个具有高准确率和时效性病理检测技术你GET了吗？
参考文献：
[1]张卫琴.免疫组化技术在病理诊断中的应用[J].安徽医药,2012,16(11):1700-1702.
[2]杨勇,等.术中冰冻切片免疫组化染色的应用体会[J].长江大学学报,2007,4(3).
[3]李俸媛,等.术中冷冻切片快速免疫组化染色及其应用[J].临床与实验病理学杂志,2003,19(6).
[4]贾晓敏.术中快速冰冻切片免疫组化染色研究[J].临床医药实践,2013,22(1):36-37.
[5]沈元龙,等.术中冰冻切片快速免疫组化HE染色技术诊断硬化性肺细胞瘤和肺腺癌的应用对比[J].安徽医学,2019,40(12):1392-1394.
[6]刘梅,等.术中快速直接免疫组化在乳腺病变和前哨淋巴结诊断中的应用[J].诊断病理学杂志,2018,25(3).
[7]马国荣.浅谈快速免疫组化在冷冻中应用的利弊[J].诊断病理学杂志,2018,25(6):471-476.