CRISPR

YSE 1  cas9

文章导读：

在过去几年中，晚期非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者的治疗策略发生了深远的变化 新一代测序技术使人们发现了可以用特异性药物靶向的驱动突变。然而，尽管肺癌是基因组学驱动肿瘤学的范例，但仍有较高比例的 NSCLC 患者(约50%)无法从目前已知的靶向治疗中获益。因此，发现新的靶基因改变可能会扩大可以从这些治疗策略中受益的人群。西班牙的研究人员发现新的药物靶点，YES1基因。首先研究人员通过免疫组织化学染色技术对338位患者的肺癌组织和癌旁组织检测，发现YES1基因在肺癌组织是高表达的。另，又对CCLE和TCGA数据库中肿瘤数据进行分析（捷易可提供此项服务），发现有约23%癌细胞系中YES1发生改变。其次，研究人员通过体外实验和体内实验并借助过表达技术以及CRSIPR-Cas9技术（捷易可提供此项服务）研究YES1对肺癌细胞增殖和转移的影响，确认YES1基因是可以作为肺癌不良预后的标志。最后，以YES1基因为药物靶点进行药筛，发现达沙替尼抑制剂可有效控制肺癌细胞的增殖和转移。

CRISPR-Cas9技术是新兴的基因组编辑工具，与之前的基因编辑工具相比，CRISPR-Cas9可对任意位置DNA序列进行编辑且操作简便，使用该技术能够进行细胞水平和动物水平的单基因或多基因的组成型/条件性/组织特异性敲除，敲入或定点突变。这一技术在一系列基因治疗的应用领域都展现出极大的应用前景，例如血液病、肿瘤和其他遗传疾病。

期刊：Am. J. Respir. Crit. Care Med. 影响因子：15.239

DOI: 10.1164/rccm.201807-1292OC

研究思路：

注：红色框内的CRISPR-Cas9，生信分析等捷易均提供此项实验服

研究亮点：

本研究借助过表达技术及CRISPR-Cas9技术确定了YES1基因可作为非小细胞肺癌(NSCLC)预后标志。另，以YES1基因为治疗新的治疗靶点，SFK抑制剂可能会对大部分非小细胞肺癌患者有益。

研究结果：

1.YES1的拷贝数及表达与非小细胞肺癌(NSCLC)的驱动相关

研究人员通过免疫组织化学染色技术对338对肺癌及癌旁组织进行检测发现YES1在肺癌组织中是高表达的。同时发现高表达YES1患者存活率较低。另，对TCGA和CCLE数据库中癌细胞数据进行分析，也发现YES1的异常表达。推测，YES1异常可能会驱动肺癌的发生。

图1 YES1在肺癌组织中高表达且生存率较低

2.YES1过表达显著诱导了肿瘤的生长和转移

通过过表达技术对H2009，A549，Calu-1，SW900等癌细胞系进行YES1高表达，发现促进了肿瘤细胞的增殖。另，将这些肿瘤细胞注射入小鼠体内发现过表达YES1的肿瘤体积较大且发生了转移。表明YES1高表达确实与肺癌的驱动有关。

图2 YES1高表达促进肿瘤的增殖及转移

3.YES1的低表达可抑制肿瘤的增殖和侵袭

体外实验中，通过siRNA干扰技术对高表达YES1的肺癌细胞系进行敲低，发现抑制了癌细胞的增殖。进一步，在体内实验中，通过CRISPR-Cas9技术（捷易生物可提供技术服务）敲除癌细胞中YES1基因，得到稳定敲除YES1的癌细胞系，并注射入小鼠体内，与高表达YES1细胞系相比，发现肿瘤生长受到抑制且侵袭能力较低。

图4. YES1的低表达可抑制肿瘤的增殖和侵袭

4.达沙替尼抑制剂可有效控制肺癌细胞的增殖和转移

体外实验和体内实验中，用达沙替尼抑制剂处理癌细胞或接种肿瘤细胞的小鼠，发现，达沙替尼抑制剂可抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。

图4. 达沙替尼抑制剂可有效控制肺癌细胞的增殖和转移

捷易生物CRISPR-Cas9服务：

http://www.gemple.com.cn/Technology-Service/gene/platform/

稿件来源：营销中心 Tina

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