shRNA干扰腺病毒载体构建技术原理

shRNA干扰腺病毒载体由腺病毒基因组序列和细菌质粒序列构成。细菌质粒序列含有一个Ampicillin抗性基因和一个高拷贝复制子pUCori。腺病毒基因组序列是从元件5'ITR开始，到元件3'ITR结束。

腺病毒基因组序列可容纳两个外源基因表达盒子：一个是shRNA表达盒子，另外一个是marker基因表达盒子。Marker基因表达盒子已经克隆在载体上，无需重新构建。我们提供了EGFP和mCherry两种荧光marker您选择。shRNA表达盒子则包括三部分序列：U6启动子、shRNA和终止子。U6启动子和Marker基因表达盒子已经克隆在pDown入门克隆上，每次构建载体，只需通过annealing-ligation技术将感兴趣的shRNA和终止子克隆到pDown载体上，再通过site-specific recomination cloning技术将pDown入门克隆克隆到腺病毒载体上即可。