(WO2018068691) 一种抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途
开了这个公众号没几个月，发现和尚不是一个好词儿了。郁闷的逛一个大V微博看到这个，觉得很神奇，所以八了一下，凑工作量。
故事很简单：就是某公司发现Drug A和Drug B联用后，不仅减低了A的剂量，还基本消除了B单用时候最大的副作用并降低了其他一些副作用，所以就很开森的申报这个专利。
具体可以看看本号之前复制来的：ASCO 2018 上披露的Drug B的数据。
发明名称 : 一种抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途
技术领域
[0001]
本发明涉及一种一种抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途。
背景技术
[0002]
PD-1抗体特异性识别并结合淋巴细胞表面PD-1，阻断PD-1/PD-L1信号通路，进而激活T细胞对肿瘤的免疫杀伤作用，调动机体免疫系统而清除体内肿瘤细胞。WO201508584公开了一种新的抗PD-1抗体，目前PD-1抗体正处于临床试验阶段，已经显示出一定的抗肿瘤作用。
[0003]
阿帕替尼是全球首个晚期胃癌的口服抗血管生成药物，对VEGFR-2具有高度选择性，强效抗血管生成。在一项关于阿帕替尼二线以后治疗转移性胃/胃食管结合部癌患者的多中心随机双盲安慰剂对照Ⅲ期试验中，结果显示与安慰剂相比，阿帕替尼单药能将中位总生存延长1.8个月，中位无进展生存延长0.8个月，且不良事件可控(Randomized,Double-Blind,Placebo-Controlled Phase III Trial of阿帕替尼in Patients With Chemotherapy-Refractory Advanced or Metastatic Adenocarcinoma of the Stomach or Gastroesophageal Junction.J Clin Oncol,2016Feb 16)。阿帕替尼的结构式如式(I)所示。
[0004]
[0005]
CN101676267A公开了阿帕替尼的一系列盐，例如甲磺酸盐、盐酸盐等。CN101675930A公开的临床前的动物实验也显示阿帕替尼联用细胞毒类药物如奥沙利铂、5-Fu、多西他赛、阿霉素，能明显增加其疗效。
[0006]
目前尚无PD-1抗体和VEGFR抑制剂联用获批上市，但有多个PD-1抗体(其他公司的)与VEGFR抑制剂(如舒尼替尼，索拉菲尼等)正处于临床II/III期，适应症分别为恶性肝癌(索拉菲尼与PD-1抗体联用)和转移性肾细胞癌(舒尼替尼与PD-1抗体联用)，初步结果显示两种药物联用效果均优于单药。
[0007]
WO2015119930公开了一种PD-1抗体与阿昔替尼联用的用途，WO2015088847公开了一种PD-1抗体与帕唑帕尼联用的用途。但是这些VEGFR抑制剂，包括索拉菲尼、舒尼替尼、阿昔替尼以及帕唑帕尼与阿帕替尼的作用机制有所不同，阿帕替尼对VEGFR-2具有最强的抑制作用，但对于其它激酶则抑制作用较差或完全不具有抑制作用，即阿帕替尼对于VEGFR-2具有高度的选择性，因此其治疗的疾病也与前述药物有所不同，其与PD-1联合能否产生协同作用，从而提高疗效值得进一步研究；另外，根据目前PD-1单独给药临床研究显示(Phase I study of the anti-PD-1antibody SHR-1210in patients with advanced solid tumors.(2017):e15572-e15572)，PD-1抗体在单独应用治疗时，毛细血管瘤发生率高达79.3％、甲状腺功能减退发生率为29.3％、瘙痒发生率为19.0％、腹泻发生率为10.3％，如此高发的不良反应无疑给肿瘤患者的精神健康和生存质量造成了负担；因此降低其用药时的不良反应非常重要
[0008]
发明内容
[0009]
本发明提供了一种抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途。
[0010]
优选的，其中所述VEGFR抑制剂是VEGFR-2抑制剂。
[0011]
本发明优选的VEGFR抑制剂是按照CN101676267A中公开的测试方法对VEGFR激酶的IC50小于100nM，而对EGFR、HER2、FGFR无抑制活性(IC50>10000nM)，特别优选的VEGFR抑制剂是VEGFR-2抑制剂，其对VEGFR-2激酶的IC50小于50nM，优选小于20nM，更优选小于10nM，最优选小于5nM，而同时对VEGFR-1或VEGFR-3抑制效果较差，例如其IC50大于20nM，优选大于50nM。
[0012]
在本发明优选的实施方案中，所述VEGFR-2抑制剂为阿帕替尼或其可药用盐。
[0013]
PD-1抗体是已知的，优选所述的PD-1抗体的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。
[0014]
所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
[0015]
其中，前面所述的各CDR序列如下表所示：
[0016]
[表0001]
[0017]
优选的，所述的PD-1抗体为人源化抗体。
[0018]
优选的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。
[0019]
所述人源化抗体重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。
[0020]
特别优选的所述的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。
[0021]
前述的人源化抗体重、轻链的序列如下所示：
[0022]
重链
[0023]
[0024]
轻链
[0025]
[0026]
在本发明优选的实施例方案中，所述VEGFR抑制剂还可选自MP-0250、DE-120、ALN-VSP、Aflibercept、Anecortave、BI-695502、Bevacizumab、PF-06439535、Carboxyamidotriazole、Vanucizumab、RG-7716、Bevacizumab类似物、Navicixizumab、Ranibizumab、Ranibizumab类似物、Conbercept、IBI-302、BI-836880、ARQ-736、RPI-4610、LMG-324、PTC-299、ABT-165、AG-13958、Brolucizumab、PAN-90806、Vatalanib、ODM-203、Altiratinib、TG-100572、OPT-302、TG-100801、CEP-7055、TAS-115、Ilorasertib、Foretinib、JNJ-26483327、Metatinib、R-1530、Tafetinib、Vorolanib、Donafenib、Subutinib、Regorafenib、VGX-100、ENMD-2076、Anlotinib、Ningetinib、Tesevatinib、Tanibirumab、Lucitanib、Cediranib、Chiauranib、IMC-3C5、Glesatinib、KRN-633、Icrucumab、PF-337210、RAF265、Puquitinib、SU-014813、Tivozanib、Fruquintinib、Sitravatinib、Pegaptanib、Pazopanib、Vandetanib、Axitinib、Sulfatinib、Ramucirumab、Plitidepsin、Orantinib、Alacizumab pegol、Telatinib、 Ponatinib、Cabozantinib、Lenvatinib、Brivanib Alaninate、Linifanib。
[0027]
在本发明的用途中，所述癌症优选为表达PD-L1的癌症；更优选为乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、肾癌、肝癌、黑素瘤、非小细胞肺癌；最优选为非小细胞肺癌、黑素瘤和肾癌、肠癌，所述的肠癌包括大肠癌、结直肠癌等。在给药时，阿帕替尼优选以可药用盐的形式给药，所述的阿帕替尼可药用盐可选自甲磺酸盐、盐酸盐。
[0028]
具体地，在给药时，其中所述的PD-1抗体的用量可以为0.5－30mg/kg，优选2－10mg/kg，更优选2－6mg/kg，最优选3mg/kg；可以每1至3周给药一次，优选每2周给药一次。对于成年人类，也可以使用固定剂量，例如100－1000mg每次，优选200－600mg，。所述的VEGFR抑制剂的剂量可以为3－200mg/kg，对于成年人类，可以使用固定剂量，例如100-1000mg、250－1000mg、优选400-850mg，100-500mg,可以每天给药一次。
[0029]
本发明中，所谓“联合”是一种给药方式，其包括两种药物先后，或同时给药的各种情况，此处所谓“同时”是指在同一给药周期给予PD-1抗体和VEGFR抑制剂，例如在2天内，或1天内给予两种药物。所谓“先后”给药，则包括在不同给药周期内分别给予PD-1抗体和VEGFR抑制剂的情况。这些给药方式，均属于本发明所述的联合给药。
[0030]
在本发明优选的实施方案中，所述的PD-1抗体以注射的方式给药，例如皮下或静脉注射，注射前需将PD-1抗体配制成可注射的形式。特别优选的PD-1抗体的可注射形式是注射液或冻干粉针，其包含PD-1抗体、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，优选所述聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯为聚山梨酯20、40、60或80，最优选聚山梨酯20。最为优选的PD-1抗体的可注射形式包含PD-1抗体、醋酸盐缓冲剂、海藻糖和聚山梨酯20。
[0031]
本发明提供上述抗PD-1抗体联合上述VEGFR作为治疗制备治疗肿瘤的药物。
[0032]
本发明提供上述抗PD-1抗体联合上述VEGFR作为减少药物不良反应的药物,优选的，所述的药物不良反应选自由抗PD-1抗体引起或由VEGFR抑制剂引起。
[0033]
本发明提供上述抗PD-1抗体联合上述VEGFR作为降低抗PD-1抗体单独施用剂量和/或VEGFR抑制剂单独施用剂量的药物。
[0034]
在本发明中，提供了一种治疗肿瘤/癌症的办法，包括向患者施用上述抗PD-1抗体和上述VEGFR抑制剂。
[0035]
在本发明中，提供了一种降低抗PD-1抗体单独施用剂量和/或VEGFR抑制剂单独施用剂量的方法，包括向患者施用上述抗PD-1抗体联合上述VEGFR抑制剂。
[0036]
优选的，与PD-1联合使用时，所述VEGFR抑制剂的给药剂量是其单独施用 剂量的10％-100％，优选10％-75％，更优选75％、50％、25％、12.5％。
[0037]
优选的，与VEGFR联用时，抗PD-1抗体剂量是抗PD-1抗体单独施用剂量的10％-100％，优选10％-50％。
[0038]
在本发明优选的实施例方案中，当PD-1抗体与VEGFR抑制剂联合使用时，可减少由抗PD-1抗体和/或免疫介导的药物不良反应；优选的，所述的不良反应选自血管相关不良反应、腺体机能减退、皮肤不良反应、呼吸系统不良反应、肝脏相关不良反应、内分泌相关不良反应、消化系统不良反应、肾脏相关不良反应、疲劳、发热；所述优选血管相关不良反应选自血管瘤、血管炎、淋巴管瘤、所述腺体功能减退选自甲状腺机能减退、甲状旁腺功能减退、胰腺功能减退、前列腺功能减退；所述皮肤不良反应选自瘙痒症、荨麻疹、皮疹、毒性表皮坏死症；所述呼吸系统不良反应选自肺炎、支气管炎、慢性阻塞性肺病、肺纤维化；所述肝脏相关不良反应选自肝炎、肝功能异常；所述内分泌相关不良反应选自I型糖尿病、II型糖尿病、低血糖症；肾脏相关不良反应选自肾炎、肾衰竭；所述消化系统不良反应选自腹泻、恶心、呕吐、肠炎、便秘；更优选的，所述药物不良反应选自血管瘤、甲状腺机能减退、甲状旁腺功能减退、瘙痒症、肺炎、肝炎、肝功能异常、I型糖尿病、肾炎、肾衰竭。
[0039]
本发明还提供了一种药物套组，或者一种药物包装盒，其中含有前述的VEGFR抑制剂和PD-1抗体。
附图说明
[0040]
图1.给药抗体和化合物对荷瘤小鼠MC38(PD-L1)移植瘤相对体积的影响；
[0041]
图2.给药抗体和化合物对MC38(PD-L1)移植瘤荷瘤小鼠体重的影响，其中*表示p<0.05,vs空白对照组；
[0042]
图3.给药抗体和化合物对荷瘤小鼠MC38(PD-L1)移植瘤的疗效-肿瘤重量。
具体实施方式
[0043]
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。
[0044]
实施例1：PD-1抗体、甲磺酸阿帕替尼单用或二者联用对转入PD-L1基因的小鼠结肠癌细胞MC-38(PD-L1)移植瘤C57人PD-1转基因小鼠的疗效
[0045]
1、研究目的
[0046]
以人PD-1转基因小鼠为受试动物，评价PD-1抗体和阿帕替尼联用后对转入PD-L1基因的小鼠结肠癌细胞MC-38(PD-L1)移植瘤C57人PD-1转基因小鼠的疗效。
[0047]
2、受试抗体和化合物
[0048]
PD-1抗体按WO2015085847公开的方法制备，对应其代号为H005-1，其重、轻链的序列如本发明中SEQID NO：7和SEQID NO：8。批号：P1512，200mg/每瓶，配成20mg/ml备用。
[0049]
甲磺酸阿帕替尼，按CN101676267A公开的方法制备，批号：668160401；分子量：493.58；纯度：99.60％。
[0050]
3、实验动物
[0051]
人PD-1转基因C57小鼠，SPF，体重不均等，雌雄各半。从英国IsisInnovation Limited公司购买。
[0052]
4、药物配制
[0053]
PD-1抗体(3mg/kg)：PD-1抗体原液(20mg/ml)用PBS配成0.3mg/ml浓度，腹腔注射体积0.2ml/小鼠。
[0054]
阿帕替尼(200mpk)：400mg阿帕替尼，溶于20ml 0.5％NaCMC，配成20mg/ml,每只灌胃0.2ml。
[0055]
溶媒为HIgG(3mpk)：溶于0.5％CMC，配制成0.3mg/ml,腹腔注射体积0.2ml/小鼠。
[0056]
5、试验方法
[0057]
5.1 C57小鼠与实验室环境适应性饲养>5天。
[0058]
5.2肿瘤细胞移植
[0059]
人PD-1转基因C57小鼠提前一天备皮，于6月12日在右肋部皮下接种MC38(PD-L1)细胞(5×10 6/只)，肿瘤生长8天，长至142.17±13.30mm 3后将动物随机分组(d0)，8只/组(其中每组前四只为雄性，后四只为雌性)，共4组。
[0060]
5.3给药剂量及方法
[0061]
PD-1抗体腹腔注射，Q2D*7(2天一次，共7次)，阿帕替尼，口服灌胃，QD*14(每天一次，共14天)。具体药物给药方案见表1。
[0062]
5.4移植瘤体积及小鼠体重测定
[0063]
每周测量2次瘤体积和体重，记录数据。
[0064]
5.5数据统计
[0065]
使用Excel 2003统计软件：平均值以avg计算；SD值以STDEV计算；SEM值以STDEV/SQRT计算；组间差异P值以TTEST计算。
[0066]
肿瘤体积(V)计算公式为：V＝1/2×L 长×L 短 2
[0067]
相对体积(RTV)＝V T/V 0
[0068]
抑瘤率(％)＝(C RTV-T RTV)/C RTV(％)
[0069]
其中V 0、V T分别为实验开始时及实验结束时的肿瘤体积。C RTV、T RTV分别为实验结束时的空白对照组及实验组的相对肿瘤体积。
[0070]
6、试验结果
[0071]
本次实验结果显示，PD-1抗体腹腔注射，Q2D*7。化合物阿帕替尼，口服灌胃，QD*14。观察至21天时，PD-1抗体(3mpk)抑瘤率达到20.40％，阿帕替尼(200mpk)单用组抑瘤率达到35.67％；PD-1抗体(3mpk)+与阿帕替尼(200mpk)联用组抑瘤率达到63.07％(相对于HIgG对照组有显著差异)，其他单用组相对于HIgG对照组均无显著差异。从实验结果来看，PD-1抗体(3mpk)+阿帕替尼(200mpk)联用组的药效是优于PD-1抗体和阿帕替尼单用的药效。给药各组小鼠体重正常，显示药物无明显毒副作用。具体数据见表1及图1－3。
[0072]
实施例2：抗PD-1抗体联合甲磺酸阿帕替尼治疗晚期恶性肿瘤的临床研究
[0073]
入组标准：(1)晚期恶性肿瘤；(2)一线或二线或二线以上化疗失败；(3)具有可测量的病灶；(4)ECOG评分0-1分。
[0074]
受试药物：市售甲磺酸阿帕替尼片；实施例1中的PD-1抗体。
[0075]
给药方法：截止2017年9月20日共筛了31例受试者，已经入组30例受试者(其中14例受试者已经退出治疗，仍有16例受试者再组给药中)。
[0076]
001-005例给药方法为PD-1抗体静脉滴注，3mg/kg，2周/次；阿帕替尼口服，500mg，一日一次；006-010例给药方法为PD-1抗体静脉滴注，200mg，2周/次；阿帕替尼口服，125mg，一日一次；011-031例为PD-1抗体静脉滴注，200mg，2周/次；阿帕替尼口服，250mg，一日一次。
[0077]
临床结果：在有效性上，6周有24例可评价的疗效数据DCR为83.3％(20/24)，12周有19例可评价疗效数据DCR为63.2％(12/19)，18周有10例可评价疗效数据DCR为70％(7/10),24周5例可评价疗效数据DCR为80％(4/5)，目前有2例肝细胞癌受试者的24周疗效为PR，PFS长达6个月以上。24例可评价的数据中最佳疗效有4例PR，15例SD，5例PD，虽然ORR仅为16.7％，但DCR高达79％，疾病控制率很高且部分受试者的PFS达到6个月以上，具体结果见表2、表3、表4。此外，阿帕替尼在单药应用治疗实体瘤(如胃癌、胃食管结合部腺癌、肝癌等)剂量通常高达850mg/日(阿帕替尼说明书)，而在本发明实施例中，阿帕替尼与PD-1抗体联用，使阿帕替尼剂量降低至125mg/日，且与单独给予阿帕替尼相比有效性和安全性更佳。在安全性上，截止9月20日，8例受试者共报了11例次的严重不良反应(SAE)，SAE发生率为26.7％(8/30)。而大部分严重不良反应的发生由于001-005受试者(试验初期阿帕替尼的探索剂量较高，为500mg)出现7例次的SAE，后续修改方案调整剂量后发现不仅可以继续维持良好的抑瘤效果，并显著降低了由于高剂量阿帕替尼引发的药物不良反应；另外，在该次临床研究中，惊喜的发现，阿帕替尼与PD-1抗体在联合治疗恶性肿瘤的过程中发现，与PD-1抗体单独应用相比，几乎不发生血管瘤相关不良反应，仅有1例受试者发生血管瘤也是因为不耐受二者联用选择单独使用PD-1抗体所导致的。
[0078]
实施例3：抗PD-1抗体联合甲磺酸阿帕替尼治疗晚期非小细胞肺癌的Ⅱ期临床研究
[0079]
入组标准：(1)晚期非小细胞肺癌；(2)一线或二线或二线以上化疗失败；(3)具有可测量的病灶；(4)ECOG评分0-1分。
[0080]
受试药物：市售甲磺酸阿帕替尼片；实施例1中的PD-1抗体。
[0081]
给药方法：PD-1抗体，2周一次，静脉滴注，每次200mg；甲磺酸阿帕替尼口服每日一次，每次250mg或375mg或500mg。
[0082]
临床结果：截至7月28日，共筛选15例受试者，其中已经入组12例。共12例受试者完成至少1周期用药观察，10名患者(10/12)疾病稳定，1名患者部分缓解。具体情况见表5。此外，在甲磺酸阿帕替尼和PD-1抗体联用过程中，我们惊奇的发现，二者联用在增强疗效的同时也减轻了PD-1抗体单独使用时的不良反应。在本研究中，常见不良反应通常为1～II级，与PD-1抗体或免疫相关不良反应如毛细血管瘤发生率仅为8％(1例)、甲状腺功能减退发生率仅为8％(1例)、无患者发生腹泻等消化道不良反应和瘙痒等皮肤不良反应；而在2017年ASCO公开的PD-1抗体单独用于治疗实体瘤的I期临床报道显示(Phase I study of the anti-PD-1antibody SHR-1210in patients with advanced solid tumors.(2017):e15572-e15572)，PD-1抗体在单独应用治疗时，毛细血管瘤发生率高达79.3％、甲状腺功能减退发生率为29.3％、瘙痒发生率为19.0％。腹泻发生率为10.3％。因此甲磺酸阿帕替尼与PD-1抗体联用不仅可以缓解或控制晚期经化疗失败的非小细胞肺癌的肿瘤增殖，同时降低PD-1抗体治疗相关或免疫介导相关的不良反应，提高患者生存质量。
[0083]
[0084]
[0085]
[0086]
表5入组患者疗效评
[0087]
权利要求书
[权利要求 1]
一种抗PD-1抗体和VEGFR抑制剂联合在制备治疗癌症的药物中的用途。
[权利要求 2]
根据权利要求1所述的用途，其中所述VEGFR抑制剂是VEGFR-2抑制剂。
[权利要求 3]
根据权利要求1所述的用途，其中所述的VEGFR-2抑制剂为阿帕替尼或其可药用盐。
[权利要求 4]
根据权利要求1所述的用途，其中所述的PD-1抗体的轻链可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
[权利要求 5]
根据权利要求4所述的用途，其中所述的PD-1抗体为人源化抗体。
[权利要求 6]
根据权利要求5所述的用途，其中所述人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。
[权利要求 7]
根据权利要求5所述的用途，其中所述人源化抗体重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。
[权利要求 8]
根据权利要求5所述的用途，其中所述的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。
[权利要求 9]
根据权利要求1所述的用途，其中所述癌症为表达PD-L1的癌症；优选为乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、肾癌、黑素瘤、非小细胞肺癌；最优选为非小细胞肺癌、黑素瘤、肝癌和肾癌。
[权利要求 10]
一种降低抗PD-1抗体或VEGFR抑制剂导致的不良反应的方法，包括向患者联合施用如权利要求1-3任意一项所述的VEGFR抑制剂和权利要求4-8任意一项所述的PD-1抗体。
[权利要求 11]
一种减少PD-1抗体或VEGFR抑制剂单独施用剂量的方法，包括向患者联合施用如权利要求1-3任意一项所述的VEGFR抑制剂和权利要求4-9任意一项 所述的PD-1抗体。
[权利要求 12]
根据权利要求3所述的用途，其中所述的阿帕替尼可药用盐选自甲磺酸盐、盐酸盐。
[权利要求 13]
根据权利要求1所述的用途，其中所述的PD-1抗体的用量为100-1000mg每次，优选200-600mg。
[权利要求 14]
根据权利要求1所述的用途，其中所述的VEGFR抑制剂的用量为250-1000mg，优选400至850mg。
[权利要求 15]
一种药物包装盒，其中含有权利要求1-3任意一项所述的VEGFR抑制剂和权利要求4至8任意一项所述的PD-1抗体。
附图
[ 图 0001]
[ 图 0002]
[ 图 0003]