荧光定量(qPCR)结果整理的辅助小工具

写在前面

荧光定量(qPCR)早已是各个分子生物学实验室常用的简单的实验技术。十年的变化很大。10年前(我大一)到实验室时,常规的pcr都不舍得加多0.2ul的rTaq,更不提跑一个qPCR就烧掉大几百的荧光定量。伴随着测序成本的降低和科研经费支持的增加(主要是说我们小打小闹的单位),qPCR实验天天都做,天天都要处理和分析数据。

写这个小工具的动机

针对qPCR数据的分析方法有两种,其中一种即为 2deltadelta....(具体请参考荧光定量PCR的随机手册)。虽然事实上,每台机器应该都会有随机软件可以用于分析,但可能多数人还是并不习惯或者喜欢使用该些软件。或许主要原因是....用起来太麻烦。
三四年前,我记得我一直有喊师弟或者师妹去写一个脚本或者软件,这样会简化分析流程,可以省下很多时间。但或许,没有做过定量PCR的师弟或者师妹,并不会了解到,整理结果数据,是一件繁杂和痛苦的事情。
近期,硕士课题组的师兄和师妹希望能有一个相对便捷的,整理qPCR结果的工具,恰好家里网络出了点问题,我便随手写了一个。

小工具的使用

输入数据

需要的输入数据,只有三列,用制表符分隔,用户可以用Excel整理成以下形式,并另存为文本文件,或者直接新建一个txt文件,并黏贴进去后保存。

数据说明:

  1. 第一行是标题行,可以省略

  2. 第一列是样本名称

  3. 第二列是看家基因的Ct值(比如Actin的...)

  4. 第三列是关注的基因的Ct值

  5. 示例数据中,每个样本是三个重复,而实际上可以无限个重复

  6. 重复可以不放在相邻的行

注意,第一个样本,将会作为Control,亦即,可以预计,其计算结果为1

使用工具

打开工具

拖拽或者通过摁钮选择,设置输入文件

设置一个输出文件路径

点击Start即可得到结果

结果解读

如上图,结果文件中:

  1. 第一行为标题行

  2. 第一列为样本信息

  3. 第三列为相对表达量均值

  4. 第四列为标准差

直接输出图片

顺手把可视化的也写上,毕竟用Excel加个误差棒还是有点麻烦。

写一个没人写的,顺手加上一些可视化的功能,这样就有种闭环的感觉。

写在后面

很久很久没有更新了,主要原因是....暂时没有发现特别有用的,尤其是对我自己有用的功能。当然,课题组主要做实验的朋友,似乎也不需要新的什么工具。
课题课题....还是要继续想办法。

(0)

相关推荐

  • PCR定量与微流控技术

    目前市场上的PCR产品主要是基于ABI开创的qPCR技术平台和荣研化学开创的LAMP技术平台,有的公司会在这两个技术平台的基础上进行研发创新,主要还是分成变温和恒温两大类,而对于PCR的定量功能实现这 ...

  • q-PCR技术的详细介绍及应用

    Real time qPCR主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析,具有操作简便.快速高效.高通量.高敏感性等特点 ...

  • 错过荧光定量PCR商机的你,绝不能再错过他了,罗氏都下手了

    来源:体外诊断网 永诺生物介绍 广州永诺生物科技有限公司成立于2010年,位于广州国际生物岛,是一家以微流控技术开发和应用为主的高新技术企业,公司业务涵盖三大板块:数字PCR研发生产及试剂开发.临床医 ...

  • 实时荧光定量PCR (qPCR)技术服务

    实时荧光定量PCR:指在 PCR 扩增过程中,荧光信号被收集,转化成为扩增和熔解曲线,以实现对 PCR 进程进行实时检测,具体提供数据是基线,荧光阈值和 Ct 值. 实时荧光定量PCR (qPCR)检 ...

  • 实时荧光定量PCR|qPCR检测是什么?

    实时荧光定量PCR技术(Real-time quantitative PCR),是指在PCR反应体系中加入荧光基因,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 ...

  • MPB:中科院城环所苏建强、朱永官等-功能基因高通量定量方法

    为进一步提高<微生物组实验手册>稿件质量,本项目新增大众评审环节.文章在通过同行评审后,采用公众号推送方式分享全文,任何人均可在线提交修改意见.公众号格式显示略有问题,建议电脑端点击文末阅 ...

  • 推荐六款录屏直播辅助小工具

    总时不时有老师问我视频中怎么有个"小视频"?桌面内容又是怎么放大的?那个手势是怎么加上去的?回答了好多次了,感觉大家对这类辅助工具知道得不多,所以今天就整理了几个这样的工具,欢迎大 ...

  • 挖掘SRA的辅助小工具(NCBI高通量测序数据收录库)

    写在前面 伴随高通量测序技术的普及,海量的测序数据被产生并上传到网络数据库,如NCBI SRA.我们每个人都可以很轻易地获得这些数据,并用于有生物学问题针对性地分析.数据容易获取,但数据具体来源和信息 ...

  • 荧光定量小课堂丨这么实用的曲线图分析法怎么可以不学!——熔解曲线分析

    说起曲线图,一直都是小编心中的痛.因为每次看到它们,小编就会想起学生时代的噩梦--函数. 就是这种"恐怖"的图 从小学开始被各种函数虐得体无完肤,譬如:常年保持"抛物线& ...

  • 平台小知识vol.1:实时荧光定量PCR

    分子病理检测需要用到各种先进的数据处理分析仪器和软件,即大多数小伙伴会说的"平台",在核酸的层面上,对样本进行深度剖析,提炼最需要获得的信息,是这些平台所给予使用者的优质" ...

  • 实时荧光定量PCR实验技术原理

    实时荧光定量PCR实验原理:将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性.低温复性.适温延伸的热循环,并遵循聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游 ...

  • 荧光定量PCR技术在食品检测领域中应用

    随着生活水平提高,人们对食品质量要求越来越高,而目前广泛应用物理.化学.仪器等检测食品方法,由于存在某些局限,已不能满足现代食品安全检测需要.随着生物技术发展,尤其是自从发明聚合酶链式反应(polym ...

  • 荧光定量pcr实验常见问题梳理

    一.无Ct值或Ct值延迟出现:扩增曲线信号不佳,曲线不平滑:标准曲线线性差. 1.扩增产物大小不合适:实时荧光定量PCR扩增片段的长度通常在80-150 bp之间,如果调整反应的时间有可能扩增500b ...