鲁米诺/异鲁米诺/吖啶酯DMAE-NHS/吖啶酯Me-DMAE-NHS的区别及应用
化学发光原料主要有三种:鲁米诺类,吖啶酯类,电化学发光。在我们国内免疫学的发展主要经过了三个阶段:放射免疫法(RIA)已经处于衰退期,仍普遍用于县级以上医院,试剂系列化:酶联免疫发(ELISA)普遍用于临床机构,产品成熟,试剂尚未系列化(运用色原ADPS,TOOS,MAOS等同过氧化氢偶联的方法就是属于此类)。化学发光免疫法(CLIA)这个是比较先进的方法,个别较大医院应用,在国外已经比较成熟,但国内尚属于导入期或成长期,主要依赖进口。鲁米诺、异鲁米诺、碱性磷酸酶AMPPD的化学发光检测需要酶参与属于酶促化学发光吖啶酯系列如吖啶盐、吖啶磺酰胺、吖啶酰肼等发光反应不需要酶参与,属于直接化学发光,灵敏度更高三联吡啶钌 属于电化学发光,这个对检测机构要求高设备昂贵,国内能用的较少。
鲁米诺和异鲁米诺的区别介绍:
鲁米诺和异鲁米诺两个都是化学发光剂,在过氧化物酶或血红蛋白、铁等的催化下,同过氧化氢反应,发出蓝色荧光。因此可以用鲁米诺来检测微量血迹,以及细胞中的铜、铁及氰化物等。
异鲁米诺虽然使用并没有鲁米诺那么广泛,但是在血液检测上有着不可替代的作用。环状酰肼结构是鲁米诺与异鲁米诺化合物发生化学发光的主要结构,对其进行相关修饰会导至化学发光特性几乎完全丧失;对鲁米诺和异鲁米诺化合物氨基进行修饰,会导至鲁米诺的发光效率明显降低,而异鲁米诺的发光效率却明显著提高。
鲁米诺在水中的溶解度很低,一般溶在碱性溶液里,例如Luminol储备液0.01mol/L :1.772g鲁米诺用0.1mol/L,的氢氧化钠溶液溶解,显色原底物如TOOS、MAOS,荧光底物,化学发光底物如鲁米诺、吖啶酯,这些都是非常重要的底物。
鲁米诺吖啶酯用于免疫试剂盒,如肿瘤标志物、心肌损伤标志物,肝肾炎,性病等。
吖啶酯DMAE-NHS 和吖啶酯Me-DMAE-NHS的区别介绍:
吖啶酯DMAE-NHS 和吖啶酯Me-DMAE-NHS非常相似,差别是吖啶的N原子上连的一个是硫酸甲酯基,一个是三氟甲基磺酸基。都比传统吖啶酯AE-NHS位阻大,抗水解能力强。除了吖啶酯不需要酶的催化之外,其它的都是作为辣根过氧化物酶HRP的底物,在HRP的催化下才能与过氧化氢反应。
吖啶酯化学发光标记常用的几种缓冲液有Tri-HCl、PBS/BSA、MES等缓冲液,具体的可以根据标记的对象蛋白/抗体、核酸,适应的pH调整,以选用合适的浓度及合适的缓冲剂。
在检测时,Trinder‘s显色试剂TOOS、MAOS等与4-AA偶联显色反应,在本质上与化学发光法类似,都是作为过氧化物酶的指示底物,只不过一个是作为色原底物,一个是作为发光底物。
吖啶酯化学发光的关键在于吖啶酯在碱性条件下与过氧化氢相互作用形成过氧化合物的活泼中间体,然后再在电激发的条件下转化为稳定的终产物:吖啶酮,同时能量以光的形式释放出来。吖啶酯化学发光反应机理的特点反应光淬灭的效应较小,而且反应过程中的发光基团的解离、发光效率等都不会受到连接臂长短的影响。
化学发光检测在临床应用越来越广泛,比如以下相关检测:
甲状腺激素检测、生殖激素检测、肾上腺/垂体激素检测;
贫血因子、肿瘤标记物、感染性疾病;
糖尿病、心血管系统、病毒标记物;
骨代谢、过敏性疾病、治疗药物监测等。
鲁米诺/3-氨基苯二甲酰肼/发光氨
异鲁米诺/4-氨基邻苯二甲酰肼
吖啶酯DMAE-NHS
吖啶酰肼NSP-SA-ADH
吖啶酯ME-DMAE-NHS
TOOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐
MAOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐
ADOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基l)-3-甲氧基苯胺钠盐
TOPS /N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐
ADPS/N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐
ALPS/N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠盐
DAOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐
HDAOS/N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐
MADB/N,N-二(4-磺丁基)-3,5-二甲基苯胺钠盐
三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐Tris-HCL
三(羟甲基)氨基甲烷Tris
N,N-二羟乙基甘氨酸BICINE
3-(环己胺)-1-丙磺酸CAPS
3-吗啉丙磺酸MOPS
N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸TAPS
N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-3-丙磺酸 EPPS
3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸MOPSO
4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES
吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH
吖啶酯-T4结合物
吖啶酯-T3结合物
吖啶磺酰胺盐-N-乙胺基马来酰亚胺
吖啶磺酰胺盐-T4结合物
吖啶磺酰胺盐-T3结合物
生物素-T4结合物
化学发光分析试剂及标记物
生物素-T3结合物
生物素-NHS活性酯
吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH
吖啶酯NSP-DMOAE-NHS
吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHS
Cy3-NHS酯
Cy7-NHS酯
5-羧基荧光素-NHS酯
6-羧基荧光素-NHS酯
5(6)-羧基荧光素-NHS酯
6-羧基荧光素
zzj 2021.2.24