类风湿性关节炎（RA）及动物模型

类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以关节病变为主的系统性自身免疫性疾病。以慢性、进行性、侵袭性关节部位炎症为主要表现，临床特征为关节红肿疼痛甚至僵直、破骨细胞的形成以及关节骨质受损等，严重可导致关节畸形乃至功能丧失，致残率高。RA多发于中老年女性人群，我国整体发病率约0.3-0.4%。发病机制尚不明确，可能由遗传、感染、环境等因素综合导致。

目前临床治疗RA仍以非甾体抗炎药和抗风湿类药物如甲氨蝶呤、柳氮磺吡啶、羟氯喹等。近年来抗体类药物发展迅速，如TNF-α单抗（Infliximab，Adalimumab）、IL6受体单抗（Tocilizumab）、CD20抗体（Rituximab）等药物对于风湿性关节炎的治疗能够取得较为理想的疗效。

目前类风湿性关节炎的动物模型主要分为佐剂诱导（AIA）和胶原（CIA）诱导两种，其中由于CIA模型通常可在小鼠上成模而使用范围更广。

胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）模型

应用DBA/1小鼠，第0天注射Ⅱ型胶原蛋白与弗氏完全佐剂（CFA），第21天注射Ⅱ型胶原蛋白与非弗氏完全佐剂（IFA），可诱导小鼠关节炎发生，小鼠发病程度、节点较为稳定，严重程度区分度较高，适用于抗自体免疫性疾病药物的评价。

a. 临床评分与细胞因子检测

Ⅱ型胶原蛋白免疫2次之后，DBA/1小鼠陆续发病且严重程度随时间升高。每日根据炎症严重程度进行评分可见，模型组病变较严重，而IL17抗体作为阳参试剂可显著控制疾病发生发展，并抑制发病率的持续增加。

图5：注射CII胶原造模后28-42天内，关节炎评分和发病率持续增加，血浆炎症因子IL6水平激增；给予IL17A抗体后，发病和炎症因子水平皆受到抑制。

实验终点收集小鼠血浆通过ELISA检测PD Marker IL-6的血浆浓度，可见模型组IL-6含量显著升高，抗体可抑制IL-6升高的趋势。

图6：注射CII胶原造模后28-42天内，关节炎评分和发病率持续增加，血浆炎症因子IL6水平激增；给予IL17A抗体后，发病和炎症因子水平皆受到抑制。

b. Micro-CT和病理学检查

实验终点对小鼠脚趾、踝关节进行Micro-CT检查和病理学分析。Micro-CT检查显示，模型组小鼠关节骨质受到严重损伤，而抗体产生了显著保护作用。

图7：Micro-CT结果显示，关节炎造模使小鼠骨关节受到显著破坏，产生骨质损伤；IL17A抗体可显著逆转骨关节损伤

HE染色结果显示，CIA造模造成了小鼠踝关节的严重损伤和大量炎症细胞浸润，而IL17A抗体给药逆转了损伤和炎症反应；使用甲苯胺蓝染色分析踝关节软骨情况显示，模型组小鼠踝关节软骨部分缺失且密度不均，而抗体组小鼠软骨未见显著损伤。

图8：H&E染色结果显示造模关节炎小鼠关节腔病变、异常增生严重，炎症细胞大量浸润；甲苯胺蓝染色结果显示小鼠关节软骨受到明显损伤；IL17A抗体可以显著的逆转上述关节炎相关的病理变化