非洲猪瘟抗体检测试剂盒操作视频说明
非洲猪瘟抗体检测试剂盒
使用说明书
联系call版号:1991-4747-194
介绍
非洲猪瘟(African Swine fever,简称:ASF)抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的非洲猪瘟抗体。
本试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被纯化的ASF抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有ASF病毒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
组份
1 |
抗原预包被板条 |
1/2块 |
7 |
阴性对照 |
2ml |
2 |
酶标记物 |
11/22ml |
8 |
阳性对照 |
1.6ml |
3 |
10倍浓缩洗涤液 |
100ml |
9 |
血清稀释板 |
1/2块 |
4 |
显色液 |
11/22ml |
10 |
封板膜 |
2/4张 |
5 |
样本稀释液 |
100ml |
11 |
说明书 |
1份 |
6 |
终止液 |
15ml |
需自备的设备及试剂
1. 微量移液器: 0.5µl-10µl、10µl-100µl、100µl-1000µl。
2. 一次性移液器吸头。
3. 量筒:500ml。
4. 96孔板酶标仪。
5. 蒸馏水或去离子水。
6. 洗瓶或洗板机。
样品制备
取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。
洗涤液的准备
浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。
样品的稀释
在血清稀释板中按1:100的体积比稀释待检血清。
注意:阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。
注意事项
1. 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
2. 不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
3. 底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
4. TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
5. 检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
6. 所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
8. 血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的最大容量为300μl/孔。
操作步骤
1. 取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔,阳性对照2孔,取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中,轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。
2. 盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育30分钟。
3. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。
4. 每孔加酶标记物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
5. 小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6次, 方法同3。切记最后在干净吸水纸上拍干。
6. 每孔加显色液100µl,轻微震荡混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
7. 每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。
结果判定
用酶标仪于450nm(630nm作参比波长)读取吸光度OD值。
试验成立的条件是:
阴性对照(N)OD值<0.2,同时阳性对照(P)OD值≥0.6;
计算方法:
样品OD值÷阳性对照OD均值 = S/P值
阴阳性判断:
S/P<0.25判为阴性;
S/P≥0.25判为阳性;
有效期
贮存方法: 2 - 8ºC下贮存。
有效期: 12个月。