条件性基因敲除小鼠技术实验流程
条件性基因敲除主要通过染色体位点特异性重组酶系统实现,如Cre-loxP、Flp-FRT、Dre-Rox等,其中最常用的是Cre-loxP系统。在待敲除目的基因序列两端各插入一个loxP序列,得到Floxed (flanked by loxP)小鼠。将Floxed小鼠与组织或细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠交配,从而获得目的基因在特定组织或细胞中敲除的小鼠,而该基因在其他组织或细胞中正常表达。
条件性基因敲除技术优势
避免全身性敲除小鼠可能出现的胚胎致死,通过与不同Cre小鼠交配,可使目的基因的缺失发生在实验动物发育的不同阶段或组织;
若与控制Cre表达的其他诱导系统相结合,如Cre/ERT、Tet/TetO-Cre系统,则可以实现对目的基因同时在空间与时间两方面调控。
条件性基因敲除实验流程
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