转基因大鼠的鉴定方法及注意事项
转基因大鼠的鉴定:
用DNA原核显微注射的方法建立的转基因大鼠,外源基因在大鼠基因组上的插入是随机的,并且常呈现成串的头尾相接的多拷贝的插入,拷贝数可以高达几十个。外源基因在染色体上的插入位点一般是一个,少数情况下也可能是多位点插入。我们通常采用PCR的方法来鉴定外源基因是否成功的整合到大鼠基因组中。
大鼠出生后大约7天左右,剪取其脚趾并提取基因组进行PCR鉴定,检测目的基因是否整合到大鼠基因组中。
注意事项:
1)每只F0代鼠基因型都不一样,不能进行F0之间的自交,只能先与野生型交配,筛选出基因型一致的F1。(假如F0代有多个位点的外源基于整合,F1还有可能有多种基因型)。
2) 获得F1鼠后,可以进行蛋白表达鉴定,优先筛选出表达的鼠后再进行后续的传代和保种。
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