油茶提取物的抑菌作用研究,手机千寻学术网
油茶提取物的抑菌作用研究
四川农业大学动物医学院药学系（雅安 625014）
摘要：采用打孔法及二倍稀释等方法研究油茶提取物对鸡源大肠杆菌、肺炎链球菌及金黄色葡萄球菌的抑菌活性，并测定其生长曲线。结果显示，不同浓度的油茶提取物对三种菌株表现出了不同的抑菌作用，其中对大肠杆菌的抑制作用较强，对肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用不显著；油茶提取物对三种菌株的最小抑菌浓度（MIC）均为0.5g/ml，且在该MIC条件下，油茶提取物对细菌的生长具有显著的抑制作用。结果表明，油茶提取物对鸡源大肠杆菌、肺炎链球菌及金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用。
关键词：油茶提取物；抑菌作用；最小抑菌浓度；生长曲线
油茶(Camellia oleifera Abel)，别名茶子树、茶油树、白茶花。它是中国主要的木本食用油料，被称为是“东方的橄榄油”，与棕榈、椰子和橄榄合称为世界四大木本油料植物[1]。油茶籽油中含有油酸、亚油酸、亚麻酸、植物甾醇和角鲨烯等营养物质，都容易被人体消化吸收，具有降低胆固醇、预防和治疗高血压、心血管疾病的作用[2]。在过去的科学研究中，人们对油茶籽和茶油的研究较为深入，对油茶籽榨油后所剩余的油茶饼的研究较为稀缺，仅有些许如油茶籽在榨油后形成的饼粕，通常用于提取茶皂素[3]。
本实验主要研究油茶榨油后剩余的油茶饼提取物对三种常见细菌的抑菌作用。在过去油茶饼仅仅只是被当做肥料和农药运用于农业生产中，现在通过本次实验，对油茶饼进行更加深入的研究后，可以将油茶饼提取物的抑菌作用运用到食物防腐等方面，这将会大大提高油茶的利用价值。
1材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药材
新鲜普通油茶籽(Camellia oleifera Abel Seed)于2011年11月采自湖南省永州市井头圩镇。
1.1.2 菌株
鸡源大肠杆菌O78（Escherichia coli，CVCC1418）、肺炎链球菌（Streptococcus，CVCC 2350）、金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus aureus，CVCC 2261）购自中国兽医药品监察所。按常规方法复苏，配制成107 cfu/ml的菌悬液。
1.1.3 培养基
营养肉汤培养基，MH肉汤培养基按常规方法配制。
1.2 方法
1.2.1油茶提取物的制备
将榨油后的油茶籽用石油醚脱脂3次，然后先加10倍蒸馏水浸泡1h后，文火煎煮40 min，再加8倍量水，文火煎煮30 min，最后加6倍量水，文火煎煮20 min，每次煎煮完后用8层纱布过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至生药1 g/ml的浓度。121℃高压灭菌15 min。4℃冰箱保存备用。
1.2.2 打孔法测定油茶提取物对三种菌株的敏感性
无菌条件下，用移液器吸取供试菌液100 μl滴入固体培养基表面，用涂布棒将菌液均匀涂布于培养基表面，用灭菌的打孔器（直径为6 mm）在每个平皿培养基上打上等距4孔，将药液稀释成1、0.5、0.25、0.125g/ml四个浓度后滴满各孔，静置30 min后平稳转入37℃培养24 h，取出测量抑菌直径，实验重复3次，取平均值。抑菌效果判定标准：抑菌直径≥20 mm为极敏，15~19 mm为高敏，10~14 mm为中敏，10 mm以下为低敏。
1.2.3 二倍稀释法测定油茶提取物对三种菌株的最小抑菌浓度（MIC）
分别取对数生长期的三种菌株，加入到含油茶提取物 1、0.5、0.25、0.125、0.0625g/ml的液体培养基中，使菌液终浓度为106 cfu/ml，阴性对照为液体培养基。将各试管放入37℃摇床中培养24 h 后取出培养物均匀涂布于琼脂培养基上，平皿置于 37℃恒温培养箱中继续培养，24 h 后取出观察，平皿上的菌落数小于 5 个的最小稀释度的药物浓度即为MIC。实验重复三次。
1.2.4 油茶提取物对三种菌株生长曲线的影响
三种菌株分别培养至对数生长期时，将100ml细菌悬液分装至250ml三角瓶内。将油茶提取物加入到细菌悬液中，使其终浓度分别为1/16 MIC, 1/8 MIC, 1/4 MIC, 1/2 MIC, MIC，2MIC。随后将细菌悬液置于37℃摇床培养，并开始计时，每30min从培养瓶中吸取0.5 ml细菌悬液测定其OD600值。根据实验结果绘制生长曲线图。
2 结果与分析
2.1油茶提取物对三种菌株的敏感性
由表1可见，不同浓度的油茶提取物对三种菌株均表现出了一定的抑菌作用。其中，1 g/ml的油茶提取物对链球菌的抑制作用最强，其抑菌圈为12 mm，抑菌效果为中敏，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为10mm和11mm。
表1、不同浓度油茶提取物的抑菌作用
药物浓度（g/ml）抑菌圈（mm）
大肠杆菌链球菌金黄色葡萄球菌
1101211
0.5899
0.25666
0.125666
2.2油茶提取物对大肠杆菌、链球菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度
由表2可以看出，油茶提取物对三种菌株的MIC均为0.5 g/ml。
表2油茶提取物对三种菌株的最小抑菌浓度的测定
药物浓度（mg/ml）细菌生长情况
大肠杆菌链球菌金黄色葡萄球菌
1---
0.5---
0.25
0.125
0.0625
-表示无细菌生长， 表示有细菌生长
2.3 三种菌株的生长曲线
由图1可以看出，1/2-1/16MIC的油茶提取物对三种菌株的生长没有抑制作用。MIC（0.5 g/ml）的油茶提取物对三种菌株的生长均有明显的抑制作用，细菌不能达到正常的生长高峰进入对数生长期，3～6 h 后直接进入衰亡期。
图1 不同浓度油茶提取物对三种菌株生长曲线的影响
A：大肠杆菌，B：链球菌，C：金黄色葡萄球菌
4讨论
本实验主要是研究油茶提取物对细菌的抑制作用，主要考察了对常见的革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌）和革兰氏阴性菌（大肠杆菌）的抑制作用。考察的指标分别是抑菌圈、最小抑菌浓度（MIC）和生长曲线。最终的实验结果表明，油茶提取物在浓度为0.5mg/ml时，此浓度既为大肠杆菌、链球菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度，同时在此浓度下，对三种菌株均有较强的抑制作用，并随着浓度的升高，抑菌作用在一定范围内在增强。
本实验通过研究证实了油茶提取物对细菌具有一定的抑制作用。我国是世界上山茶科植物分布最广的国家，同时也是世界上最大的油茶生产基地[4]，因此对于油茶的利用度当然是希望100%，不管是油茶的果皮、油茶的茶油还是现在研究只能作为肥料的油茶的茶饼。通过本实验对油茶提取物抑菌作用的研究可以对油茶的利用度进一步提高，同时油茶是一种天然的植物食用品，是无毒无害的，再者其提取物具有一定的抑菌作用，那将其提取物用于食品的防腐保存上，不仅对人体无害，还有一定的保健作用，并具有很高的预防免疫作用，因而具有很高的实用价值。
参考文献
1 许鹏波，薛立．油茶施肥研究进展[J]．中国农学通报．201l，27(8)：1-6．
2 Snyder J M，Frankel E N，Selke E．Capillary gas chromatographic analyses of headspace volatiles from vegetable oils[J]．Journal of Oil & Fat Industries，1985，62(12)：1657-1679．
3 李湘洲，张胜，李文生，等．油茶饼粕多糖对体外α-葡萄糖苷酶的抑制作用[J]．湖南大学学报（自然科学版），2012，11（39）：71-73.
4 傅长根，周鹏．植物油领域的新军-茶油[J].江油食品工业，2003，（2）：19-21．