实验室污染 ——预防篇

 实验室污染 ——预防篇

上一篇我们讲述了PCR实验室污染的消除篇，本篇将带领大家学习实验室污染的预防部分。

古人云：凡事预则立，不预则废。PCR实验室如果布局科学合理，实验小心谨慎，多管齐下，就可以做到防微杜渐，有效控制或避免实验室污染。

01

日常实验防污染

1.日常实验中要设置阴性对照

在我们的日常实验中设置阴性对照的作用就是检测实验室是否出现污染。实验室的污染必须在第一时间发现，否则会导致后期实验结果不可信。 

2.PCR的移液器要专用

PCR实验室是分4个区域，分别是试剂准备区、样本处理区、扩增区、产物分析区（有全自动荧光PCR仪可将扩增区与产物分析区合为一个区）；每个区域均设置该区域专用移液器，区与区之间不可混用。切记不可将已吸取过高浓度的质粒或PCR产物的移液器去准备PCR体系。

3.实验操作谨慎

①进入试剂准备区进行试剂配制及分装的工作，谨记勤换手套。

②选择质量好的离心管，密封性好且便于开盖。

③实验台面有序摆放，按洁净区—半洁净区—污染区从左至右摆放实验用品。

④打开离心管前应先离心，将管壁及管盖上的液体离心到管底；开管时需注意动作要轻，以防止液体溅出。

⑤实验结束后请及时清理台面、离心机、恒温仪等，处理废弃物，并开启紫外灯进行消毒。

4.移液器操作

由于操作时，不慎将模板吸入枪内或沾上枪头是一个很重要的污染源，因而加样时要特别注意。

①准备该区域专用的移液器。

②吸液要慢，尽量一次性吸样，忌多次抽吸；切勿形成喷雾，避免造成交叉污染，产生气溶胶。

③移液器移动过程中，注意移动路线避开样本管、离心管、八连管等上方区域，切勿从这些干净区域上方经过。

④先将反应体系提前配置好后，进行每人份分装，最后再加入模板。

⑤推荐使用带滤芯枪头。

5.UNG防污染体系

UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除。UNG酶的最佳活性温度为50℃，95℃灭活。从而预防非特异性PCR扩增和污染。日常实验中，选择使用含UNG酶的试剂，有助于防止PCR产物引起的污染。

6.预防气溶胶的产生

气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系，在空气与液体面摩擦时，比如在操作时比较剧烈地动作及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。

①穿着专业防静电实验服、佩戴口罩、手套、头套、鞋套、护目镜。

②实验过程中尽量减少走动及交谈，实验室内人员不宜过多，以两人为宜。实验操作应在生物安全柜中进行。

③在操作时请勿剧烈地摇动反应管，开盖、吸样等操作。

④实验过程中尽量减少加热、剧烈震荡等过程。

02

实验室使用防污染

实验室建设

实验室建设需符合临床基因实验室验收标准。

①合理将实验室区域分隔开来：设置缓冲区、专用走廊，以及试剂准备区、样本处理区、扩增区、产物分析区（如有全自动荧光PCR仪，三区和四区可以合并为一区）。

②试剂准备区：设置缓冲间，实验区域保持相对正压或常压，实验室所用移液器吸头必须带滤芯，所有设备耗材均专区专用。

样本处理区：设置缓冲间，实验区域保持相对正压或常压，粘贴国际通用的生物危害标识。配备生物安全柜，实验室所用移液器吸头必须带滤芯，所有设备耗材均专区专用。

扩增区：设置缓冲间，实验区域保持相对负压，防止扩增产物气溶胶流出。

关于实验室污染专题到此就结束啦，希望能给大家带来帮助~以后也会有很多小tips分享，大家多多关注公众号哦！