【干货】点突变小鼠鉴定方法

1、点突变F0代阳性鼠鉴定

选择发生点突变的前后一段片段设计引物，设计引物时，还要考虑一下突变后是否有酶切位点，使酶切点两边的片段大小有区分，将扩增产物电泳后切胶测序，因为点突变的小鼠与野生型小鼠相比，片段大小没有太大区别，只有测序比对才能确定具体的碱基变化。

2、点突变F1代阳性鼠鉴定

选择发生点突变的前后一段片段设计引物，设计引物时，还要考虑一下突变后是否有酶切位点，使酶切点两边的片段大小有区分，将扩增产物电泳后切胶测序，因为点突变小鼠与野生型小鼠相比，片段大小没有太大区别，只有测序比对才能确定具体的碱基变化。

若是突变的点之后的序列正好是某种酶特异识别的位点，则可以用酶切实验进行验证。若是有突变，则酶可以特异性识别进行切割，否则酶无法识别进行切割。扩增电泳后回收DNA片段（比如切胶）进行酶切，酶切成功则发生点突变的片段被切为两段，野生型的不会被酶识别切割，可以从PCR图比对片段大小来确认是否酶切成功，进而确认该位点是否突变成功。