细胞转染实验具体方法

细胞转染：HEK 293T细胞是慢病毒包装生产及滴度测定，细胞转染，条件培养基制作，蛋白表达验证等试验所必须的工具细胞。HEK 293T细胞为人胚肾细胞；

细胞转染的目的粗略理解为使用阳离子聚合物+质粒构成的复合物转入细胞内，让你转入的质粒瞬时表达，产生一个短暂（约持续96h）的效应，用于短期实验。

转染的原理：阳离子聚合物能够和带负电的质粒形成复合物，复合物穿膜（或是膜融合或是内吞）被细胞“吃掉”，从而将你的目的质粒带入细胞内。大约在转染完成后的48h，可以对细胞的转染效率和蛋白表达进行检测。

检测时，转染效率=检测阳性细胞数/检测时总细胞数*100%，一般使用流式细胞术进行检测。

转染试剂：常用的转染试剂有Higene、Lipo系列、PEI。

转染条件和过程：以PEI用作转染试剂的转染为例，配制浓度为1μg/μL的PEI（配制方法网上搜索一下很好查），准备你的待转质粒（假设浓度为也为1μg/μL=1000ng/μL）。

PEI转染时的原则为，质量比，PEI:质粒=3:1；转染时需要使用无血清无双抗的培养基将PEI和质粒分别做成稀释液（一般称为A液和B液），再混合在一起方便两者聚合。以10cmdish的转染为例，10cm dish一般转染10μg的质粒,那么我们需要30μg的PEI。

A液：10μL质粒→500μL 无抗无血清DMEM，混匀

B液：30μLPEI →500μL 无抗无血清DMEM，混匀

B液逐滴加入A液中，涡旋1min，或枪头吹打约80次，室温孵育15-20min，不需要再次混匀直接填加到铺好的10cm dish中。

转染后18h，将培养液更换成新鲜的DMEM完全培养基；转染24-96h后检测。