看完这一篇 快速学会 T-SPOT 4 种结果判定
相信在临床工作的各位医生，对「T-SPOT」这个名称都不陌生，或者至少有所耳闻。那么，T-SPOT 到底是什么？它的原理是什么？T-SPOT 阳性到底能不能诊断结核感染呢？让我们共同深入认识它吧！
「T-SPOT」是什么？
「T-SPOT」实际上是检测试剂盒 T-SPOT.TB®的简称。T-SPOT.TB 是γ干扰素释放试验（interferon gamma release assay，IGRA）的一种，具体采用的检测方法是一种简化的酶联免疫斑点（enzyme-linked immunospot ，ELISPOT），用于体外检测外周血中经过结核分支杆菌特异性抗原激活的效应 T 细胞。因此，T 代表效应 T 细胞，SPOT 即斑点，TB 代表结核。T-SPOT.TB®由英国 Oxford Immunotec 公司生产。
T-SPOT.TB®检测的原理
人体对结核分枝杆菌的免疫反应主要通过 T 细胞活化介导。对结核分枝杆菌致敏的 T 细胞，再次接受结核相关抗原刺激后，活化的效应 T 细胞（包括 CD4+和 CD8+T 细胞）能够产生γ干扰素，通过 ELISPOT 技术检测产生γ干扰素的单个 T 细胞。ELISPOT 检测是高灵敏度的，在细胞分泌的细胞因子扩散稀释前，其能够立即捕获细胞周围所分泌的细胞因子，灵敏度超过传统的 ELISA 实验。
T-SPOT.TB®检测用来刺激 T 细胞的是结核分枝杆菌特异性抗原：ESAT-6 和 CFP10 抗原，这两个抗原在 BCG 菌株和绝大部分非结核分枝杆菌（除外堪萨斯分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、海分枝杆菌）中都不存在，因此有较高的特异性，跟卡介苗和绝大部分的肺结核分支杆菌无交叉反应。
T-SPOT.TB®检测通过 ELISPOT 技术和特异性抗原从原理上保证了其敏感性及特异性。
T-SPOT.TB®检测的步骤
收集外周血标本（一般用肝素抗凝管）。实验室分离外周血单个核细胞（PBMCs），并计数，加入至 4 个微孔（分别为阳性对照孔、A 孔：ESAT-6、B 孔：CFP-10 和阴性对照孔）。注意外周血最好在 6 小时内采集，否则 T 细胞活性会降低（假阴性）。
单层 T 细胞（绿色球形）铺在微孔里，微孔里有预包被的γ干扰素抗体（黄色 Y 形），微孔中加入结核特异性抗原，37 度孵育 16~24 小时。
被特异性抗原激活的 T 细胞分泌γ干扰素，被预包被的抗原捕获。洗板，加入二抗，孵育 1 小时。
洗板，加入能够产生对应斑点的物质，每个斑点代表了一个产生γ干扰素的 T 细胞。计数。
由此可见，T-SPOT.TB 检测的是人体对结核分枝特异性抗原的免疫反应（而非菌本身），阳性结果提示患者体内存在被结核分枝杆菌（以及少数非结核分枝杆菌）致敏的 T 淋巴细胞。因此，T-SPOT.TB 阳性的患者可能是活动性结核病患者、既往感染者或者是潜伏性感染的状态。
值得注意的是，除了外周血之外，T-SPOT.TB 也用于其他标本的检查，如脑脊液、胸水、腹水，当然这些标本送检的前提是有足够的淋巴细胞（T 细胞）。
T-SPOT.TB 的结果判定
1.T-SPOT.TB 报告的结果包含：阳性对照情况； A 孔结果（A 孔点数-阴性对照孔的点数）；B 孔结果（B 孔点数-阴性对照孔的点数）；阴性对照情况
2. 既往以 6 个点作为 cut-off；最新一版说明书对此进行了修改，结果如下：
⑴阳性结果：A 孔结果或 B 孔结果 ＞ 8 spots
⑵阴性结果：A 孔结果及 B 孔结果 ＜ 4 spots
⑶不确定结果（Borderline）： A 孔或者 B 孔结果 5, 6, 或 7 spots（建议重做）
⑷无效（可能为细胞数不够无法完成试验；阳性孔无反应）
图.T-SPOT.TB 阳性与阴性结果的对比度
检测结核特异性γ干扰素释放试验的另有 QuantiFERON.TB Gold In-Tube，与 T-SPOT.TB 有相似之处，但采用全血的 ELISA 方法，目前国外使用较多，国内亦有部分应用。